| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| 1.1 导言 | 第11页 |
| 1.2 蛋白质设计方法及结构解析 | 第11-13页 |
| 1.3 人工设计蛋白的筛选平台 | 第13-15页 |
| 1.4 实验方案与预期结果 | 第15-17页 |
| 第2章 利用TEM1-β-内酰胺酶系统快速高效地对设计蛋白进行评估与修正 | 第17-85页 |
| 2.1 背景介绍 | 第18-20页 |
| 2.1.1 概述 | 第18-19页 |
| 2.1.2 pMb1-tet-pARA-bla-link_long质粒 | 第19-20页 |
| 2.2 预实验测试 | 第20-24页 |
| 2.2.1 96孔板上的预实验 | 第20-22页 |
| 2.2.2 模拟库筛选实验 | 第22-24页 |
| 2.3 建库筛选 | 第24-35页 |
| 2.3.1 建库筛选条件的确定 | 第24-30页 |
| 2.3.2 对设计蛋白Dv_1r26的建库筛选 | 第30-35页 |
| 2.4 对突变体Dv_1r26_M1的蛋白质实验 | 第35-43页 |
| 2.4.1 核磁实验 | 第36-39页 |
| 2.4.2 晶体实验 | 第39-41页 |
| 2.4.3 圆二色谱实验 | 第41-42页 |
| 2.4.4 回复突变 | 第42-43页 |
| 2.5 利用修正后的设计模型对1r26重新进行蛋白质设计 | 第43-48页 |
| 2.5.1 对设计方法的修正 | 第43-44页 |
| 2.5.2 利用修正后的模型对1r26重新进行蛋白质设计 | 第44-46页 |
| 2.5.3 E_1r26的结构解析 | 第46-48页 |
| 2.6 总结 | 第48-50页 |
| 2.7 材料与方法 | 第50-85页 |
| 2.7.1 培养基的配备 | 第50-51页 |
| 2.7.2 最小抑制浓度实验 | 第51页 |
| 2.7.3 滴度实验 | 第51-52页 |
| 2.7.4 基于TEM1-β-内酰胺酶胞内系统的建库筛选 | 第52-54页 |
| 2.7.5 电转感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| 2.7.6 蛋白质的表达纯化 | 第55-60页 |
| 2.7.7 蛋白质核磁实验 | 第60-64页 |
| 2.7.8 核磁结构的计算 | 第64-85页 |
| 第3章 利用荧光蛋白Insertion reporter系统评估人工设计蛋白的折叠性质 | 第85-101页 |
| 3.1 背景 | 第85页 |
| 3.2 荧光蛋白报告Insertion reporter的构建 | 第85-89页 |
| 3.3 IR-FS系统的荧光表现 | 第89-92页 |
| 3.3.1 插入片段的选择 | 第89页 |
| 3.3.2 IR-FS系统的荧光表现 | 第89-90页 |
| 3.3.3 加入RFP作为的内标 | 第90-91页 |
| 3.3.4 信号肽的加入 | 第91-92页 |
| 3.4 总结 | 第92-94页 |
| 3.5 材料与方法 | 第94-101页 |
| 3.5.1 多位点突变 | 第94-97页 |
| 3.5.2 quick-change PCR | 第97-98页 |
| 3.5.3 化学感受态细胞的制备 | 第98-99页 |
| 3.5.4 利用蔗糖渗透压的方法提取周质腔蛋白 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第109页 |
