| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 玉米醇溶蛋白及其品质 | 第12-13页 |
| 1.2 opaque2突变体及其应用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 o2高赖氨酸突变体及其多重效应 | 第13-14页 |
| 1.2.2 o2突变体的育种实践 | 第14-15页 |
| 1.2.3 o2突变体的特征 | 第15页 |
| 1.3 Opaque2的转录因子功能 | 第15-18页 |
| 1.3.1 O2的转录因子特征 | 第15-17页 |
| 1.3.2 O2的调控靶标 | 第17-18页 |
| 1.4 醇溶蛋白的复杂调控网络 | 第18-20页 |
| 1.4.1 OHPs | 第18-19页 |
| 1.4.2 PBF | 第19页 |
| 1.4.3 ZmMADS47 | 第19页 |
| 1.4.4 醇溶蛋白转录因子的协同调控 | 第19-20页 |
| 1.5 蛋白质的翻译后修饰 | 第20-26页 |
| 1.5.1 磷酸化 | 第20-22页 |
| 1.5.2 泛素化 | 第22-25页 |
| 1.5.3 其他翻译后修饰 | 第25页 |
| 1.5.4 翻译后修饰的交互调控 | 第25-26页 |
| 1.6 立题依据与研究意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料方法 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第27-28页 |
| 2.1.3 试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-41页 |
| 2.2.1 RNA抽提与定量PCR | 第29-31页 |
| 2.2.2 转录组测序及数据分析 | 第31-32页 |
| 2.2.3 玉米籽粒总蛋白、醇溶蛋白、非醇溶蛋白的抽提 | 第32页 |
| 2.2.4 免疫杂交 | 第32-33页 |
| 2.2.5 ChIP-Seq实验 | 第33-36页 |
| 2.2.6 外源蛋白的表达与纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.7 凝胶阻滞实验 | 第37页 |
| 2.2.8 基因枪法瞬时转化洋葱表皮细胞 | 第37-38页 |
| 2.2.9 农杆菌侵染烟草 | 第38页 |
| 2.2.10 双荧光转录激活实验 | 第38页 |
| 2.2.11 酵母双杂交实验 | 第38-39页 |
| 2.2.12 半分子荧光实验验证蛋白互作 | 第39页 |
| 2.2.13 体外泛素化实验 | 第39-40页 |
| 2.2.14 玉米籽粒细胞核与细胞质的分离 | 第40-41页 |
| 第三章 Opaque2的转录调控靶标研究 | 第41-60页 |
| 3.1 转录组测序查找受O2影响的基因和长非编码RNA | 第41-43页 |
| 3.2 GO聚类查找o2突变体中基因表达模式的变化 | 第43-44页 |
| 3.3 通过ChIP-Seq鉴定O2的直接靶标基因 | 第44-47页 |
| 3.4 结合位点分析揭示O2的顺式作用元件 | 第47-50页 |
| 3.5 RNA测序与ChIP-Seq重叠筛选O2直接调控的基因 | 第50-57页 |
| 3.5.1 O2直接靶标的筛选 | 第50页 |
| 3.5.2 O2直接调控醇溶蛋白 | 第50-53页 |
| 3.5.3 O2直接调控转录因子 | 第53-54页 |
| 3.5.4 O2直接调控氮代谢相关的酶 | 第54-55页 |
| 3.5.5 O2直接调与抗逆相关的酶 | 第55-57页 |
| 3.6 讨论与展望 | 第57-60页 |
| 3.6.1 RNA测序与ChIP-Seq探查全基因组范围内O2的直接靶标 | 第57-58页 |
| 3.6.2 O2调控醇溶蛋白 | 第58页 |
| 3.6.3 O2直接调控功能蛋白 | 第58页 |
| 3.6.4 O2通过级联调控来实现更广泛的影响 | 第58-59页 |
| 3.6.5 总结 | 第59-60页 |
| 第四章 A17对O2泛素化修饰的功能研究 | 第60-77页 |
| 4.1 前期工作介绍 | 第60-61页 |
| 4.2 A17的生物信息学分析 | 第61页 |
| 4.3 A17与O2的互作验证 | 第61-64页 |
| 4.3.1 A17与O2的酵母回转验证 | 第61-63页 |
| 4.3.2 A17与O2的半分子荧光素酶互补（LCI）实验 | 第63页 |
| 4.3.3 A17与O2的免疫共沉淀（CoIP）实验 | 第63-64页 |
| 4.4 A17的表达谱分析 | 第64-65页 |
| 4.5 A17的亚细胞定位 | 第65-66页 |
| 4.6 A17的泛素E3连接酶活性检测 | 第66-67页 |
| 4.7 A17对O2的体外泛素化和位点筛选 | 第67-69页 |
| 4.8 A17突变体中O2的泛素化检测 | 第69-70页 |
| 4.9 A17对O2活性的影响 | 第70-72页 |
| 4.10 A17对O2定位的影响 | 第72-74页 |
| 4.11 讨论与展望 | 第74-77页 |
| 4.11.1 A17与O2的相互作用 | 第74页 |
| 4.11.2 A17与O2的表达模式差异 | 第74-75页 |
| 4.11.3 O2具有多种泛素化形式 | 第75页 |
| 4.11.4 A17帮助胞质中的O2入核增强O2的转录激活能力 | 第75-76页 |
| 4.11.5 展望 | 第76-77页 |
| 附录一 qPCR法确认RNA测序得到的差异基因变化情况 | 第77-78页 |
| 附录二 具有O2结合位点的下调差异基因 | 第78-80页 |
| 附录三 引物 | 第80-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 作者在攻读博士学位期间公开发表的论文 | 第91-92页 |
| 作者在攻读博士学位期间所作的项目 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
