| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 嗜水气单胞菌的研究概况 | 第11-15页 |
| 1.1.1 嗜水气单胞菌简介 | 第11页 |
| 1.1.2 嗜水气单胞菌毒力因子简介 | 第11-15页 |
| 1.1.2.1 胞外蛋白酶 | 第12页 |
| 1.1.2.2 气溶素 | 第12-13页 |
| 1.1.2.3 粘附因子 | 第13-14页 |
| 1.1.2.4 生物被膜 | 第14-15页 |
| 1.2 细菌群体感应系统简介 | 第15-19页 |
| 1.2.1 QS1系统 | 第15-16页 |
| 1.2.2 QS2系统 | 第16-18页 |
| 1.2.3 革兰氏阳性菌群体感应系统 | 第18-19页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌群体感应系统对其毒力因子表达的影响 | 第19-21页 |
| 1.4 本论文的选题意义与研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 luxS基因缺失突变株的构建及其特性分析 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂及规格 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要培养基及溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 lux S基因缺失突变株的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.1.1 PCR引物设计及合成 | 第25页 |
| 2.2.1.2 lux S基因上下游同源臂及卡那霉素基因片段的获取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 lux S基因缺失片段的获得 | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 重组质粒载体pEASY-T1-ΔluxS的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 重组自杀质粒pWM91-ΔluxS的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.1.6 滤膜接合转化 | 第29页 |
| 2.2.2 突变株和野生株生物学特性分析 | 第29-31页 |
| 2.2.2.1 生长曲线测定 | 第29页 |
| 2.2.2.2 AI-2 活性的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 胞外蛋白酶的检测 | 第30页 |
| 2.2.2.4 生物膜形成能力的测定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-39页 |
| 2.3.1 lux S基因缺失突变株的构建 | 第31-35页 |
| 2.3.1.1 lux S基因上下游片段及卡那霉素序列扩增 | 第31页 |
| 2.3.1.2 lux S基因缺失片段的获得 | 第31-32页 |
| 2.3.1.3 重组质粒载体p EASY-T1-Δlux S的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.1.4 重组自杀质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.1.5 lux S基因缺失突变株的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 突变株与野生株生物学特性分析 | 第35-39页 |
| 2.3.2.1 生长曲线测定 | 第35-36页 |
| 2.3.2.2 AI-2 活性的检测 | 第36页 |
| 2.3.2.3 胞外蛋白酶的检测 | 第36-38页 |
| 2.3.2.4 生物膜形成能力的测定 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 ahyI基因缺失突变株、回补株的构建及其特性分析 | 第41-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂及规格 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-51页 |
| 3.2.1 ahyI基因缺失突变株的构建 | 第43-48页 |
| 3.2.1.1 PCR引物设计及合成 | 第43-44页 |
| 3.2.1.2 ahyI基因上下游同源序列及绿霉素基因片段的获取 | 第44-45页 |
| 3.2.1.3 ahyI基因缺失片段的获得 | 第45-46页 |
| 3.2.1.4 重组自杀质粒pWM91-Δahy I的构建 | 第46页 |
| 3.2.1.5 E．coli SM10(λpir)感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| 3.2.1.6 重组质粒pWM91-ΔahyI转化E．coli SM10(λpir)感受态细胞 | 第47页 |
| 3.2.1.7 重组质粒pWM91-ΔahyI的鉴定 | 第47页 |
| 3.2.1.8 滤膜接合转化 | 第47-48页 |
| 3.2.2 ahyI基因回补株的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.2.1 引物设计及合成 | 第48页 |
| 3.2.2.2 ahyI片段的PCR扩增 | 第48-49页 |
| 3.2.2.3 重组质粒pBR322-ahyI的构建及鉴定 | 第49页 |
| 3.2.2.4 筛选阳性克隆菌株 | 第49-50页 |
| 3.2.2.5 pBR322-ahyI转化缺失突变株 | 第50页 |
| 3.2.2.6 回补菌株的鉴定 | 第50页 |
| 3.2.3 突变株、野生株及回补株的生物学特性分析 | 第50-51页 |
| 3.2.3.1 生长曲线测定 | 第50页 |
| 3.2.3.2 胞外蛋白酶的检测 | 第50页 |
| 3.2.3.3 生物膜形成能力的测定 | 第50-51页 |
| 3.3 结果 | 第51-58页 |
| 3.3.1 ahyI基因缺失突变株的构建 | 第51-54页 |
| 3.3.1.1 ahyI基因上下游同源臂及绿霉素基因片段的获取 | 第51-52页 |
| 3.3.1.2 重组质粒pWM 91-Δahy I的构建与鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.1.3 突变株的筛选与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.2 ahyI基因回补株的构建 | 第54-56页 |
| 3.3.2.1 ahyI片段的PCR扩增 | 第54-55页 |
| 3.3.2.2 重组质粒pBR322-ahyI的筛选及鉴定 | 第55页 |
| 3.3.2.3 回补株的筛选 | 第55-56页 |
| 3.3.3 突变株、野生株及回补株的生物学特性分析 | 第56-58页 |
| 3.3.3.1 生长曲线测定 | 第56页 |
| 3.3.3.2 生物膜测定 | 第56-57页 |
| 3.3.3.3 胞外蛋白酶的测定 | 第57-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 结论 | 第59页 |
| 4.2 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-75页 |
| 附录A 重组自杀质粒p WM91-Δlux S构建示意图 | 第67-68页 |
| 附录B 嗜水气单胞菌lux S基因缺失突变株构建示意图 | 第68-69页 |
| 附录C 重组自杀质粒p WM91-Δahy I构建示意图 | 第69-70页 |
| 附录D 重组回补质粒p BR322-ahy I构建示意图 | 第70-71页 |
| 附录E 嗜水气单胞菌lux S基因缺失突变株基因测序序列 | 第71-73页 |
| 附录F 嗜水气单胞菌ahy I基因缺失突变株基因测序序列 | 第73-75页 |
| 附录G 研究生期间发表的学术论文及科研成果 | 第75页 |
