| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 L-天冬酰胺酶概述 | 第9-14页 |
| 1.1.1 L-天冬酰胺酶的来源及结构 | 第9-11页 |
| 1.1.2 L-天冬酰胺酶的催化机理 | 第11页 |
| 1.1.3 L-天冬酰胺酶的理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.4 L-天冬酰胺酶的应用领域 | 第12-14页 |
| 1.2 改造L-天冬酰胺酶的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2.1 化学法改造L-天冬酰胺酶 | 第14页 |
| 1.2.2 蛋白质工程改造L-天冬酰胺酶 | 第14-15页 |
| 1.3 L-天冬酰胺酶的发酵生产 | 第15页 |
| 1.4 立题依据及研究意义 | 第15-16页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第17-19页 |
| 2.1.1 质粒、菌株及引物 | 第17页 |
| 2.1.2 仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂及培养基 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 重组质粒提取 | 第19页 |
| 2.2.2 重叠延伸PCR及其产物回收 | 第19-20页 |
| 2.2.3 突变质粒构建 | 第20页 |
| 2.2.4 感受态细胞的制备与转化方法 | 第20-21页 |
| 2.2.5 重组枯草芽孢杆菌的培养方法 | 第21页 |
| 2.2.6 L-天冬酰胺酶的分离纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE电泳 | 第22页 |
| 2.2.8 L-天冬酰胺酶酶活测定 | 第22页 |
| 2.2.9 重组L-天冬酰胺酶的酶学性质研究 | 第22-23页 |
| 2.2.10 L-天冬酰胺酶的三维结构模拟与分析 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-46页 |
| 3.1 L-天冬酰胺酶突变位点的选择 | 第24-27页 |
| 3.2 单点突变对L-天冬酰胺酶酶活和热稳定性的影响 | 第27-31页 |
| 3.2.1 单点突变重组质粒的构建与转化 | 第27页 |
| 3.2.2 单点突变重组蛋白的表达与纯化 | 第27-29页 |
| 3.2.3 单点突变体的最适反应温度与温度稳定性研究 | 第29-30页 |
| 3.2.4 单点突变体的最适反应pH与pH稳定性研究 | 第30页 |
| 3.2.5 单点突变体动力学参数研究 | 第30-31页 |
| 3.3 组合突变对L-天冬酰胺酶酶活和热稳定性的影响 | 第31-39页 |
| 3.3.1 组合突变重组质粒的构建、转化与纯化 | 第31-32页 |
| 3.3.2 组合突变体的最适反应温度与温度稳定性研究 | 第32-33页 |
| 3.3.3 组合突变体的最适反应pH与pH稳定性研究 | 第33页 |
| 3.3.4 组合突变体动力学参数研究 | 第33-34页 |
| 3.3.5 L-天冬酰胺酶第107位氨基酸残基的饱和突变 | 第34-35页 |
| 3.3.6 L-天冬酰胺酶突变体的结构模拟与分析 | 第35-39页 |
| 3.4 突变菌株G107D/H125L/S299N/P348A的 5 L罐放大实验 | 第39-46页 |
| 3.4.1 5L罐分批发酵 | 第39-41页 |
| 3.4.2 不同溶氧水平对L-天冬酰胺酶合成的影响 | 第41-43页 |
| 3.4.3 补料分批发酵 | 第43-44页 |
| 3.4.4 双阶段控氧发酵 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录Ⅰ: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56-57页 |
| 附录Ⅱ：定点突变引物 | 第57-59页 |
| 附录Ⅲ：肽谱检测结果 | 第59页 |
