| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 引言 | 第10-36页 |
| 1.1 DNA损伤修复的重要性 | 第11-13页 |
| 1.1.1 DNA损伤的发生 | 第11-12页 |
| 1.1.2 DNA损伤修复的重要性 | 第12-13页 |
| 1.2 DNA双链断裂修复方式: HR和C-NHEJ | 第13-18页 |
| 1.2.1 HR修复机制 | 第13-15页 |
| 1.2.2 C-NHEJ修复机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 HR和C-NHEJ的细胞周期性调控 | 第16-18页 |
| 1.2.4 HR和C-NHEJ的协同及竞争作用 | 第18页 |
| 1.3 A-EJ修复方式 | 第18-27页 |
| 1.3.1 A-EJ修复方式的发现 | 第19页 |
| 1.3.2 A-EJ修复方式的特点: MMEJ | 第19-20页 |
| 1.3.3 A-EJ修复方式的常用研究模型 | 第20-22页 |
| 1.3.4 A-EJ修复方式的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.5 A-EJ修复与端粒融合 | 第24-25页 |
| 1.3.6 A-EJ修复与染色体转位,以及癌症发生的关系 | 第25-27页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9系统 | 第27-33页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9系统的简介 | 第28-29页 |
| 1.4.2 利用CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的研究 | 第29-31页 |
| 1.4.3 利用CRISPR/Cas9系统进行高通量筛选 | 第31-33页 |
| 1.5 本研究的内容及意义 | 第33-36页 |
| 1.5.1 研究参与A-EJ修复方式的DNA连接酶 | 第33-34页 |
| 1.5.2 全基因组筛选参与A-EJ修复通路的基因 | 第34页 |
| 1.5.3 研究意义 | 第34-36页 |
| 第2章 研究材料与方法 | 第36-80页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-42页 |
| 2.1.1 cDNA与质粒 | 第36页 |
| 2.1.2 菌株 | 第36页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第36页 |
| 2.1.4 分子克隆试剂 | 第36-38页 |
| 2.1.5 抗体 | 第38页 |
| 2.1.6 大肠杆菌培养试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.7 Western免疫印迹试剂 | 第39页 |
| 2.1.8 细胞培养试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.9 细胞转染及感染试剂 | 第40页 |
| 2.1.10 细胞基因组提取试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.11 实时定量PCR (Real-time PCR或qPCR)试剂 | 第41页 |
| 2.1.12 实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.2 实验方法 | 第42-80页 |
| 2.2.1 DNA片段、质粒及基因组纯化方法 | 第42-46页 |
| 2.2.2 质粒载体构建 | 第46-54页 |
| 2.2.3 细胞培养,细胞转染以及慢病毒感染 | 第54-60页 |
| 2.2.4 Surveyor法检测sgRNA活性 | 第60-63页 |
| 2.2.5 Western免疫印迹 | 第63-65页 |
| 2.2.6 过表达及基因敲除细胞系的建立 | 第65-69页 |
| 2.2.7 CSR检测 | 第69-71页 |
| 2.2.8 细胞增殖及药物敏感性检测 | 第71-72页 |
| 2.2.9 实时定量PCR(Real-time PCR或qPCR) | 第72页 |
| 2.2.10 染色体缺失效率检测 | 第72-74页 |
| 2.2.11 染色体转位检测 | 第74-75页 |
| 2.2.12 sgRNA高通量筛选 | 第75-78页 |
| 2.2.13 高通量测序文库的构建 | 第78-80页 |
| 第3章 研究结果 | 第80-105页 |
| 3.1 研究参与A-EJ修复通路的DNA连接酶 | 第80-92页 |
| 3.1.1 构建DNA Lig1或Lig3基因敲除的CH12F3细胞系 | 第80-83页 |
| 3.1.2 检测DNA Lig1或Lig3基因敲除细胞的CSR效率 | 第83-88页 |
| 3.1.3 检测DNA Lig1或Lig3基因敲除细胞的增殖及对药物的敏感性 | 第88页 |
| 3.1.4 检测DNA Lig1或Lig3基因敲除对染色体缺失的影响 | 第88-89页 |
| 3.1.5 检测DNA Lig1或Lig3基因敲除对染色体转位的影响 | 第89-92页 |
| 3.2 全基因组筛选参与A-EJ修复通路的基因 | 第92-105页 |
| 3.2.1 构建Cas9稳定表达的CH12F3细胞系 | 第92-93页 |
| 3.2.2 优化CRISPR/Cas9高通量筛选流程 | 第93-95页 |
| 3.2.3 在野生型CH12F3细胞中阳性对照的建立 | 第95页 |
| 3.2.4 高通量sgRNA文库筛选及其测序文库构建 | 第95-98页 |
| 3.2.5 高通量测序数据分析 | 第98-103页 |
| 3.2.6 候选基因验证 | 第103-105页 |
| 第4章 讨论 | 第105-108页 |
| 4.1 DNA Lig1和Lig3在A-EJ修复通路中的作用 | 第105-106页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9高通量筛选C-NHEJ和A-EJ通路的基因 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-130页 |
| 附录 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 论文发表 | 第132-133页 |
