| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸系统综合征病毒的研究进展 | 第11-21页 |
| 1.1 病原学特性 | 第11-19页 |
| 1.1.1 PRRSV的流行、危害及分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 PRRSV理化特性 | 第12页 |
| 1.1.3 培养特性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 基因组结构 | 第13-15页 |
| 1.1.5 PRRSV的复制过程 | 第15-16页 |
| 1.1.6 非结构蛋白 | 第16-19页 |
| 1.1.7 结构蛋白 | 第19页 |
| 1.2 PRRSV与宿主蛋白的相互作用 | 第19-20页 |
| 1.2.1 结构蛋白与宿主细胞的相互作用关系 | 第19-20页 |
| 1.2.2 非结构蛋白与宿主细胞的相互作用关系 | 第20页 |
| 1.3 本研究的意义及创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 PRRSV非结构蛋白的表达纯化及其在感染细胞中表达情况的浅析 | 第21-33页 |
| 2.1 材料及方法 | 第21-26页 |
| 2.1.1 pTriEx-NSP7-GFP、pTriEx -GFP-NSP7、pTriEx-NSP7、pTriEx-NSP12- GFP和pTriEx-NSP12质粒的构建 | 第21-23页 |
| 2.1.2 细胞培养及感染 | 第23-24页 |
| 2.1.3 免疫荧光试验 | 第24页 |
| 2.1.4 琼脂糖凝胶电泳及Western blot | 第24-25页 |
| 2.1.5 NSP7蛋白纯化 | 第25-26页 |
| 2.2 结果 | 第26-31页 |
| 2.2.1 质粒的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.2 NSP7和NSP12的原核表达及NSP7纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 不同时间点PRRSV olot/91毒株感染细胞的情况 | 第29-30页 |
| 2.2.4 PRRSV感染细胞后NSP12在不同时间点的表达情况 | 第30-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 运用高通量蛋白质组学方法鉴定与PRRSV NSP7结合的宿主细胞蛋白 | 第33-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 3.1.1 细胞培养和转染 | 第33页 |
| 3.1.2 GFP融合蛋白的免疫沉淀 | 第33-34页 |
| 3.1.3 质谱 | 第34-35页 |
| 3.1.4 Immunofluorescence assay | 第35页 |
| 3.1.5 Western blotting | 第35页 |
| 3.1.6 shRNA 沉默基因表达 | 第35页 |
| 3.2. 结果 | 第35-40页 |
| 3.2.1 融合蛋白在 293T细胞中的过量表达及Pull-down实验 | 第35-36页 |
| 3.2.2 蛋白质组学技术确定与PRRSV NSP7有潜在互作关系的宿主细胞蛋白 | 第36-37页 |
| 3.2.3 Western blotting验证细胞蛋白与NSP7的互作关系 | 第37-39页 |
| 3.2.4 String分析12种蛋白的相互关系 | 第39页 |
| 3.2.5 过氧化物氧化还原酶 4（PRDX4）的抑制实验 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 运用高通量蛋白质组学技术鉴定与PRRSV NSP12相互作用的宿主细胞蛋白 | 第42-61页 |
| 4.1 材料和方法 | 第42页 |
| 4.2 结果 | 第42-59页 |
| 4.2.1 融合蛋白在 293T细胞中的过量表达 | 第42-43页 |
| 4.2.2 Pull-down实验 | 第43页 |
| 4.2.3 蛋白质组学技术鉴定与PRRSV NSP12有潜在互作关系的宿主细胞蛋白 | 第43-55页 |
| 4.2.4 Western blotting和免疫荧光实验鉴定与NSP12有潜在互作关系的蛋白 | 第55-56页 |
| 4.2.5 IPA(Ingenuity Pathways Analysis)分析112种蛋白的相互关系 | 第56-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 HSP70对PRRSV复制的影响 | 第61-67页 |
| 5.1 材料及方法 | 第61-62页 |
| 5.1.1 细胞活性试验 | 第61页 |
| 5.1.2 HSP70抑制剂药物试验 | 第61页 |
| 5.1.3 Western blotting | 第61页 |
| 5.1.4 定量RT-PCR | 第61-62页 |
| 5.2 结果 | 第62-65页 |
| 5.2.1 HSP70抑制剂实验 | 第62-64页 |
| 5.2.2 HSP70的抑制对PRRSV转录水平及病毒生长的影响 | 第64-65页 |
| 5.3 讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 总结和展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79页 |
