| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第1章 马克思克鲁维酵母的木糖代谢和工程改造研究 | 第13-83页 |
| 1. 绪论 | 第13-16页 |
| ·以马克思克鲁维酵母作为发酵的平台 | 第13-14页 |
| ·酵母的木糖代谢途径 | 第14-15页 |
| ·马克思克鲁维酵母木糖代谢通路的改造 | 第15-16页 |
| 2. 实验原材料与实验流程 | 第16-83页 |
| ·实验原材料 | 第16-21页 |
| ·实验中用到和构建的菌株与质粒 | 第16-17页 |
| ·本研究所用到的引物 | 第17-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·试剂配制 | 第19-20页 |
| ·实验仪器与实验设备 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·DNA产物纯化 | 第21页 |
| ·小量质粒抽提 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的热激转化 | 第23页 |
| ·马克思克鲁维酵母的化学转化 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第24页 |
| ·酵母总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·Bradford法测定蛋白质浓度 | 第25-26页 |
| ·马克思克鲁维酵母基因组的抽提 | 第26页 |
| ·实验流程 | 第26-52页 |
| ·马克思克鲁维酵母的木糖还原酶的基因克隆 | 第27-30页 |
| ·马克思克鲁维酵母的木糖还原酶的重组表达 | 第30-35页 |
| ·YHJ010中木糖还原酶基因的敲除 | 第35-39页 |
| ·KmXR的S280D和S280N突变体的构建和表达 | 第39-43页 |
| ·构建重组马克思克鲁维酵母菌株表达树干毕赤酵母木糖还原酶(Psxyl1)及其突变体 | 第43-50页 |
| ·用重组马克思克鲁维酵母菌株发酵木糖和玉米芯水解液 | 第50-51页 |
| ·木糖还原酶酶活的测定 | 第51页 |
| ·RT-PCR分析Psxyl1在不同菌株中的表达水平 | 第51-52页 |
| ·实验结果和讨论 | 第52-81页 |
| ·马克思克鲁维酵母木糖还原酶的基因克隆,蛋白表达纯化以及性质分析 | 第52-61页 |
| ·马克思克鲁维酵母木糖还原酶的基因敲除及验证 | 第61-66页 |
| ·马克思克鲁维酵母木糖代谢的工程化改造 | 第66-81页 |
| ·小结与展望 | 第81-83页 |
| 第2章 绿脓杆菌群体响应系统RhlI蛋白的定向进化 | 第83-137页 |
| 1. 绪论 | 第83-86页 |
| ·细菌的群体响应(quorum sensing)系统 | 第83-84页 |
| ·群体响应系统是调控绿脓杆菌感染的一个重要机理 | 第84-85页 |
| ·抑制群体响应系统的化合物是新型抗生素 | 第85-86页 |
| 2. 实验原材料与流程 | 第86-137页 |
| ·实验原材料 | 第86-92页 |
| ·实验中用到和构建的菌株与质粒 | 第86页 |
| ·本研究所用到的引物 | 第86-89页 |
| ·培养基 | 第89-90页 |
| ·试剂 | 第90页 |
| ·试剂配制 | 第90-91页 |
| ·实验仪器与实验设备 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-96页 |
| ·DNA产物纯化 | 第92页 |
| ·小量质粒抽提 | 第92-93页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备 | 第93-94页 |
| ·大肠杆菌化学感受态细胞的热激转化 | 第94页 |
| ·大肠杆菌电激转化感受态细胞的制备 | 第94-95页 |
| ·电激转化大肠杆菌感受态细胞的方法 | 第95页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第95页 |
| ·Bradford法测定蛋白质浓度 | 第95-96页 |
| ·实验流程 | 第96-124页 |
| ·开发可以用来定向演化RhlI的高通量筛选方法 | 第96-101页 |
| ·第一轮定向演化RhlI | 第101-105页 |
| ·第二轮筛选体系的构建 | 第105-112页 |
| ·第二轮定向演化 | 第112-115页 |
| ·第三轮筛选体系的构建 | 第115-119页 |
| ·突变位点功能分析 | 第119-124页 |
| ·实验结果和讨论 | 第124-135页 |
| ·开发可以用来定向演化RhlI的高通量筛选方法 | 第124-126页 |
| ·第一轮定向演化RhlI蛋白 | 第126-130页 |
| ·第二轮定向演化RhlI蛋白 | 第130-132页 |
| ·第三轮定向演化RhlI蛋白 | 第132-133页 |
| ·突变位点功能验证 | 第133-135页 |
| ·小结与展望 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-145页 |
| 附录1 基因序列 | 第145-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第147页 |
