| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-34页 |
| ·蛋白质折叠复性 | 第10-14页 |
| ·体内蛋白质折叠 | 第10-11页 |
| ·体外蛋白质折叠复性 | 第11页 |
| ·影响蛋白质复性的关键因素 | 第11-14页 |
| ·体内蛋白质折叠的辅助因子 | 第14-22页 |
| ·促进蛋白质二硫键形成的氧化还原酶 | 第14-18页 |
| ·抑制蛋白质聚集的分子伴侣 | 第18-22页 |
| ·辅助蛋白质复性的小分子 | 第22-27页 |
| ·促进蛋白质二硫键形成的氧化还原剂小分子 | 第22-23页 |
| ·抑制蛋白质聚集的小分子 | 第23-27页 |
| ·色谱辅助复性 | 第27-32页 |
| ·凝胶过滤色谱 | 第27-28页 |
| ·离子交换色谱 | 第28-29页 |
| ·疏水相互作用色谱 | 第29-30页 |
| ·固定化金属离子亲和色谱 | 第30页 |
| ·固定化辅助复性因子色谱 | 第30-32页 |
| ·本文研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 二硫键形成对蛋白质折叠动力学的影响 | 第34-44页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料和方法 | 第34-36页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·溶菌酶的还原变性 | 第35页 |
| ·折叠动力学实验 | 第35-36页 |
| ·强度平均波长变化动力学 | 第36页 |
| ·酶活测定 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-43页 |
| ·二硫键形成的作用研究 | 第36-39页 |
| ·第一相构象折叠动力学 | 第39-42页 |
| ·第二相构象折叠速率的决定因素 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第三章 蛋白质折叠酶模拟物酰基胱胺的设计及其辅助蛋白质复性 | 第44-59页 |
| ·引言 | 第44-45页 |
| ·实验部分 | 第45-49页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·酰基胱胺的制备和表征 | 第45-47页 |
| ·蛋白质的还原变性 | 第47页 |
| ·内源荧光动力学测定方法 | 第47-48页 |
| ·氧化复性的活性动力学 | 第48页 |
| ·酶活测定 | 第48-49页 |
| ·临界胶团浓度的测定 | 第49页 |
| ·实验结果与讨论 | 第49-57页 |
| ·辛酰胱胺的氧化能力考察 | 第49-52页 |
| ·辛酰胱胺氧化能力的根源分析 | 第52-54页 |
| ·烷基链长度对酰基胱胺氧化能力的影响 | 第54-55页 |
| ·己酰胱胺对高浓度蛋白质氧化复性的影响 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第四章 折叠酶模拟物寡肽的设计及其促进蛋白质复性 | 第59-75页 |
| ·前言 | 第59-60页 |
| ·实验材料和方法 | 第60-63页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·分析测试仪器 | 第60页 |
| ·蛋白质还原变性 | 第60页 |
| ·蛋白质复性动力学实验 | 第60-61页 |
| ·酶活测定 | 第61页 |
| ·还原势的测定 | 第61-62页 |
| ·巯醇pK_a 值的测定 | 第62-63页 |
| ·实验结果与讨论 | 第63-73页 |
| ·氧化型CGC 辅助蛋白质氧化复性 | 第63-67页 |
| ·RKCGC 的设计 | 第67-68页 |
| ·中性条件下RKCGC 的辅助复性效果 | 第68-71页 |
| ·弱碱性条件下RKCGC 的辅助复性效果 | 第71-73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 第五章 同电荷离子交换介质促进蛋白质复性 | 第75-92页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·实验材料和方法 | 第76-79页 |
| ·实验材料 | 第76页 |
| ·凝胶的准备和性质确定 | 第76页 |
| ·孔隙率的确定 | 第76-77页 |
| ·蛋白质的变性及还原变性 | 第77-78页 |
| ·复性实验 | 第78页 |
| ·复性后蛋白质检测 | 第78-79页 |
| ·Zeta 电势的测定 | 第79页 |
| ·蛋白质静电势的计算 | 第79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-91页 |
| ·离子交换介质辅助带正电荷蛋白质Lysozyme 的复性 | 第79-81页 |
| ·离子交换介质辅助带负电荷蛋白质BSA 的复性 | 第81-82页 |
| ·离子交换介质辅助带负电荷蛋白质 CAII 的复性 | 第82-83页 |
| ·同电荷离子交换介质促进复性的机制 | 第83-85页 |
| ·同种电荷介质抑制聚集作用和尿素的耦合 | 第85-87页 |
| ·介质-蛋白质间静电斥力对介质抑制聚集效果的影响 | 第87-89页 |
| ·同电荷介质抑制蛋白质聚集的可能机制 | 第89-91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| 第六章 同电荷聚电解质促进蛋白质复性 | 第92-109页 |
| ·引言 | 第92-93页 |
| ·实验材料和方法 | 第93-95页 |
| ·实验材料 | 第93页 |
| ·聚电解质的准备 | 第93页 |
| ·蛋白质的变性及还原变性 | 第93-94页 |
| ·复性实验 | 第94页 |
| ·复性后蛋白质检测 | 第94-95页 |
| ·Zeta 电势的测定 | 第95页 |
| ·结果与讨论 | 第95-107页 |
| ·阳离子型聚电解质辅助带正电荷蛋白质Lysozyme 的复性 | 第95-101页 |
| ·阳离子型聚电解质辅助带正电荷蛋白质RNase A 的复性 | 第101页 |
| ·阳离子聚电解质辅助带负电荷蛋白质CAⅡ 的复性 | 第101-104页 |
| ·阴离子聚电解质 ES100 辅助 CAII 的复性 | 第104-105页 |
| ·阴离子聚电解质硫酸葡聚糖辅助 CAII 的复性 | 第105-106页 |
| ·阴离子聚电解质ES100 辅助带负电荷蛋白质EGFP 的复性 | 第106-107页 |
| ·小结 | 第107-109页 |
| 第七章 同电荷离子交换介质促进包含体蛋白质的复性 | 第109-126页 |
| ·引言 | 第109-110页 |
| ·实验材料和方法 | 第110-116页 |
| ·实验材料 | 第110页 |
| ·重组绿色荧光蛋白包含体的表达和纯化 | 第110-111页 |
| ·包含体中目标蛋白质百分含量的确定 | 第111-113页 |
| ·总蛋白质含量的测定 | 第113-114页 |
| ·活性EGFP 的纯化 | 第114-115页 |
| ·活性EGFP 蛋白的荧光标曲测定 | 第115页 |
| ·EGFP 包含体的变性 | 第115页 |
| ·EGFP 包含体的复性 | 第115-116页 |
| ·凝胶过滤色谱法测定EGFP 复性的过程 | 第116页 |
| ·结果与讨论 | 第116-124页 |
| ·EGFP 包含体表达及纯化结果 | 第116-117页 |
| ·SP Sepharose FF 辅助EGFP 包含体复性 | 第117-119页 |
| ·同电荷离子交换介质对蛋白质的纯化效果 | 第119-122页 |
| ·SP Sepharose FF 辅助复性的过程 | 第122-124页 |
| ·小结 | 第124-126页 |
| 第八章 结论与展望 | 第126-130页 |
| ·全文总结 | 第126-128页 |
| ·创新点 | 第128页 |
| ·对今后工作的建议与展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-144页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第144-147页 |
| 附录 | 第147-153页 |
| 附录一. 培养基配方 | 第147页 |
| 附录二. 包含体处理所用缓冲液 | 第147页 |
| 附录三. SDS-PAGE凝胶电泳所用试剂 | 第147-148页 |
| 附录四 EGFP荧光标准曲线 | 第148-149页 |
| 附录五 介质上洗脱的杂质蛋白样品的液质联用谱图 | 第149-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
