| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·磷脂及磷脂酶简介 | 第9-10页 |
| ·磷脂 | 第9-10页 |
| ·磷脂酶 | 第10页 |
| ·磷脂酶A2 | 第10-11页 |
| ·分泌型PLA2 | 第10-11页 |
| ·胞质型PLA2 | 第11页 |
| ·钙离子非依赖型PLA2 | 第11页 |
| ·磷脂酶A2的应用 | 第11-13页 |
| ·在脂质代谢、生物膜结构和功能研究中的应用 | 第11-12页 |
| ·在溶血磷脂和不饱和脂肪酸生产中的应用 | 第12页 |
| ·在植物油脱胶方面的应用 | 第12页 |
| ·在面包烘焙和蛋黄改性方面的应用 | 第12-13页 |
| ·在动物饲料中的应用 | 第13页 |
| ·在医疗等其他方面的应用 | 第13页 |
| ·磷脂酶A2的研究现状 | 第13-14页 |
| ·国内微生物来源磷脂酶A2的研究进展 | 第13-14页 |
| ·国外微生物来源磷脂酶A2 的研究进展 | 第14页 |
| ·乳酸克鲁维酵母表达系统 | 第14-15页 |
| ·本课题的立题意义及研究内容 | 第15-17页 |
| ·立题意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·工具酶和主要生化试剂 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·溶液的配置 | 第18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-25页 |
| ·Lactobacillus casei染色体DNA的提取 | 第19页 |
| ·L. casei DSM20011 磷脂酶A2基因的克隆 | 第19-20页 |
| ·E. coli感受态细胞的制备及转化 | 第20-21页 |
| ·E. coli JM109 质粒小量提取 | 第21页 |
| ·表达载体pKLAC1-pla2的构建 | 第21页 |
| ·K. lactis感受态细胞的制备及转化 | 第21-22页 |
| ·Kluyveromyces lactis染色体DNA的提取（玻璃珠法） | 第22页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 sPLA2酶活性的检测 | 第22页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 中pla2 基因拷贝数的确定 | 第22-23页 |
| ·培养基成分对K. lactis/pKLAC1-pla2 产酶的影响 | 第23页 |
| ·培养条件对K. lactis/pKLAC1-pla2 生长和产酶的影响 | 第23页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 产sPLA2发酵条件的优化 | 第23-25页 |
| ·分析方法 | 第25-26页 |
| ·生物量的测定 | 第25页 |
| ·sPLA2酶活力的测定 | 第25页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 发酵上清液SDS-PAGE的分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-52页 |
| ·L. casei pla2 基因在K. lactis GG799 中的重组表达 | 第26-33页 |
| ·L. casei pla2 基因编码氨基酸序列信号肽的预测 | 第26页 |
| ·L. casei pla2 基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·K. lactis GG799 表达载体pKLAC1-pla2 的构建 | 第27-29页 |
| ·K. lactis GG799 转化子的筛选与验证 | 第29-31页 |
| ·L. casei pla2 基因在K. lactis中的分泌表达 | 第31-32页 |
| ·Ca2+浓度对sPLA2酶活性的影响 | 第32-33页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 中pla2 基因拷贝数的确定 | 第33-38页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 内参基因GAPDH的克隆 | 第33-34页 |
| ·RT-QPCR反应 | 第34-37页 |
| ·重组菌pla2 基因拷贝数与相应sPLA2酶活之间的关系 | 第37-38页 |
| ·培养基成分和培养条对K. lactis/pKLAC1-pla2 生长和产酶的影响 | 第38-42页 |
| ·培养基成分对K. lactis/pKLAC1-pla2 生长和产酶的影响 | 第38-40页 |
| ·培养条对K. lactis/pKLAC1-pla2 生长和产酶的影响 | 第40-42页 |
| ·K. lactis/pKLAC1-pla2 产sPLA2发酵条件的优化 | 第42-52页 |
| ·单因素实验 | 第42-49页 |
| ·正交试验分析 | 第49-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
