| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-26页 |
| ·蛛丝蛋白简介 | 第11-15页 |
| ·蜘蛛丝的种类和功能 | 第11-12页 |
| ·蜘蛛丝的分子结构与理化性能的研究 | 第12-13页 |
| ·蜘蛛丝的应用前景 | 第13页 |
| ·蛛丝蛋白基因的研究 | 第13-14页 |
| ·蛛丝蛋白基因的表达 | 第14-15页 |
| ·转基因动物生产技术概述 | 第15-18页 |
| ·显微注射法 | 第16页 |
| ·精子载体法 | 第16页 |
| ·逆转录病毒载体法 | 第16页 |
| ·核移植法 | 第16-17页 |
| ·定位整合技术 | 第17-18页 |
| ·phiC31整合酶系统概述 | 第18-22页 |
| ·phiC31整合酶的作用机制及其优点 | 第18-19页 |
| ·phiC31整合酶在植物、动物中的应用 | 第19-20页 |
| ·phiC31整合酶在医学方面的应用 | 第20-21页 |
| ·phiC31整合酶系统的安全性分析 | 第21-22页 |
| ·Cre/Loxp系统的研究进展 | 第22-24页 |
| ·Cre/Loxp系统的结构及重组机制 | 第22-23页 |
| ·Cre/Loxp系统的应用 | 第23-24页 |
| ·本研究的意义和主要内容 | 第24-26页 |
| 2 定点整合可删除筛选标记的转拟蛛丝蛋白恭因真核表达载体的构建 | 第26-41页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·实验仪器、设备及耗材 | 第26页 |
| ·主要试剂和培养基的配置 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·目的片段胶回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·提质粒 | 第28-29页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第29页 |
| ·实验设计 | 第29-35页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·目的基因的体外扩增 | 第30-32页 |
| ·定点整合可删除筛选标记的真核表达载体pEGFP-N1-2S的构建 | 第32-35页 |
| ·实验结果与分析 | 第35-40页 |
| ·目的基因的体外扩增结果 | 第35-36页 |
| ·定点整合可删除筛选标记的真核表达载体pEGFP-N1-2S的构建 | 第36-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 3 利用phiC31整合酶mRNA生产定点整合转拟蛛丝蛋白基因绵羊细胞系 | 第41-51页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器、设备及耗材 | 第41页 |
| ·主要试剂和培养液的配置 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·phiC31整合酶mRNA的制备 | 第42-43页 |
| ·利用phiC31整合酶mRNA建立转拟蛛丝蛋白基因绵羊细胞系 | 第43-47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-50页 |
| ·phiC31整合酶基因片段扩增 | 第47页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·phiC31整合酶mRNA体外转录 | 第48页 |
| ·G418毒性试验 | 第48页 |
| ·定点整合拟蛛丝蛋白基因2S的细胞转染 | 第48-49页 |
| ·转拟蛛丝蛋白基因绵羊胎儿皮肤成纤维细胞的鉴定 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 4 利用Cre重组酶切除转拟蛛丝蛋白基因2S细胞中的筛选标记 | 第51-55页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·实验试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器、设备及耗材 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·Cre整合酶诱导表达与提取 | 第51页 |
| ·利用Cre穿膜肽切除转拟蛛丝蛋白基因2S细胞中筛选标记基因 | 第51-52页 |
| ·无标记转拟蛛丝蛋白基因2S细胞鉴定 | 第52-53页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·DNA水平鉴定 | 第52-53页 |
| ·实验结果与分析 | 第53-54页 |
| ·Cre整合酶诱导表达与提取鉴定 | 第53页 |
| ·无标记转拟蛛丝蛋白基因2S细胞系鉴定 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
