| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-13页 |
| ·共轭亚油酸简介 | 第9-10页 |
| ·共轭亚油酸概述 | 第9页 |
| ·共轭亚油酸的来源 | 第9页 |
| ·共轭亚油酸的合成 | 第9-10页 |
| ·亚油酸异构酶的研究进展 | 第10-12页 |
| ·亚油酸异构酶概述 | 第10-11页 |
| ·亚油酸异构酶的来源 | 第11页 |
| ·亚油酸异构酶的酶学性质 | 第11页 |
| ·亚油酸异构酶的催化机理 | 第11-12页 |
| ·亚油酸异构酶的克隆与表达 | 第12页 |
| ·研究的目的、意义和研究内容 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-27页 |
| ·材料与设备 | 第13-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·主要仪器 | 第13-14页 |
| ·主要酶和试剂 | 第14页 |
| ·主要溶液配制 | 第14-17页 |
| ·实验技术路线 | 第17页 |
| ·试验方法 | 第17-27页 |
| ·定点突变技术的简介 | 第17-19页 |
| ·寡核苷酸引物介导的定点突变 | 第18页 |
| ·PCR介导的定点突变 | 第18-19页 |
| ·盒式突变 | 第19页 |
| ·突变体的构建 | 第19-21页 |
| ·突变体构建的原理 | 第19页 |
| ·重组质粒PQE30-LAI的提取 | 第19页 |
| ·突变引物设计 | 第19-20页 |
| ·突变PCR | 第20-21页 |
| ·突变质粒的转化及鉴定 | 第21页 |
| ·突变质粒的转化 | 第21页 |
| ·菌落PCR的阳性鉴定 | 第21页 |
| ·DNA序列测定与分析 | 第21页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第21-24页 |
| ·IPTG诱导 | 第21页 |
| ·粗酶液的制备 | 第21-22页 |
| ·粗酶活的测定 | 第22-23页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第23-24页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE检测 | 第24-25页 |
| ·凝胶的配制 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| ·western blot | 第25-27页 |
| ·蛋白质免疫印迹法的简介 | 第25页 |
| ·western blot检测 | 第25-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-36页 |
| ·重组质粒PQE30-LAI质粒的提取鉴定结果 | 第27页 |
| ·突变位点的确定 | 第27-30页 |
| ·突变体的构建 | 第30页 |
| ·菌落PCR的阳性鉴定 | 第30-31页 |
| ·序列比对 | 第31-32页 |
| ·基因突变前后LAI在大肠杆菌中的表达和酶活测定 | 第32-35页 |
| ·共轭亚油酸含量标准曲线 | 第32-33页 |
| ·突变体粗酶液酶活力的测定 | 第33页 |
| ·蛋白质含量标准曲线的绘制 | 第33-34页 |
| ·突变体粗酶液蛋白含量的测定 | 第34-35页 |
| ·突变体诱导表达LAI的SDS-PAGE电泳检测 | 第35页 |
| ·突变体诱导表达LAI的western blot检测 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 作者简介 | 第43页 |