| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·研究背景 | 第8-9页 |
| ·丁二酸 | 第8页 |
| ·丁二酸的生物合成 | 第8-9页 |
| ·国内外研究进展 | 第9-17页 |
| ·提高丁二酸产量和转化率的主要策略 | 第9-12页 |
| ·和本研究相关的改造策略 | 第12-16页 |
| ·代谢工程的基因表达调控策略 | 第16-17页 |
| ·研究目的、意义及创新点 | 第17-18页 |
| ·技术路线和研究内容 | 第18-20页 |
| ·工具载体的构建 | 第18页 |
| ·改造PDH提高丁二酸转化率 | 第18页 |
| ·改造Dcu转运蛋白提高丁二酸生产速率 | 第18-20页 |
| 2 材料方法 | 第20-47页 |
| ·实验材料 | 第20-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第20-22页 |
| ·引物 | 第22-27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·主要的仪器设备和化学试剂 | 第28-30页 |
| ·主要溶剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·菌株培养和发酵 | 第30-31页 |
| ·分析方法和检测方法 | 第31-33页 |
| ·菌株的遗传改造 | 第33-34页 |
| ·工具载体的构建 | 第34-36页 |
| ·构建表达载体pTrc99A-M | 第34-35页 |
| ·构建pTrc99A-M-Kan载体用于基因整合 | 第35页 |
| ·构建敲除及基因表达调控质粒pXZ-CS | 第35-36页 |
| ·改造PDH提高丁二酸转化率 | 第36-45页 |
| ·构建含lpdA和lpdA突变基因的质粒 | 第36-39页 |
| ·构建产乙醇重组菌并以此为改造平台对PDH进行改造 | 第39-44页 |
| ·产丁二酸大肠杆菌菌株中对PDH进行改造 | 第44-45页 |
| ·改造Dcu转运蛋白提高丁二酸生产速率 | 第45-47页 |
| ·在Suc-T110中分别单独敲除Dcu转运蛋白 | 第45页 |
| ·在Suc-T110中对DcuB,DcuC双敲除获得菌株JC-205 | 第45页 |
| ·产丁二酸重组大肠杆菌中对转运蛋白DcuB,DcuC进行改造 | 第45-47页 |
| 3 结果与讨论 | 第47-76页 |
| ·工具载体的构建 | 第47-49页 |
| ·表达载体pTrc99A-M和整合载体pTrc99A-M-Kan的构建 | 第47-48页 |
| ·基因敲除及表达调控质粒pXZ-CS的构建 | 第48-49页 |
| ·改造PDH提高丁二酸转化率 | 第49-68页 |
| ·野生型lpdA和突变lpdA基因的质粒构建 | 第49-50页 |
| ·野生型lpdA及突变型lpdA的PDH酶活和NADH对其抑制的影响 | 第50-52页 |
| ·以产乙醇重组菌为改造平台对PDH进行改造 | 第52-65页 |
| ·应用高酶活PDH提高产丁二酸重组菌的丁二酸转化率 | 第65-68页 |
| ·改造Dcu转运蛋白提高丁二酸生产速率 | 第68-76页 |
| ·在Suc-T110中敲除丁二酸转运蛋白Dcu并对其作用进行分析 | 第68-70页 |
| ·用固定强度调控元件对转运蛋白DcuB、DcuC进行调控 | 第70-71页 |
| ·RBS文库调控丁二酸转运蛋白DcuB、DcuC提高丁二酸产量 | 第71-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 5 展望 | 第77-78页 |
| 6 参考文献 | 第78-86页 |
| 7 论文发表情况 | 第86-87页 |
| 8 致谢 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88页 |
