| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 符号与缩略语 | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-22页 |
| ·NDV致病的分子基础-F蛋白 | 第10-11页 |
| ·F蛋白疫苗的研究现状 | 第11-14页 |
| ·F蛋白基因工程疫苗的研究现状 | 第12-13页 |
| ·F蛋白表位疫苗的研究进展 | 第13-14页 |
| ·外源基因在哺乳动物细胞中表达的影响因素 | 第14-16页 |
| ·启动子CMV,CBA启动外源基因表达的研究现状 | 第14-15页 |
| ·调控元件WPRE,ITRs对外源基因表达影响的研究现状 | 第15-16页 |
| ·基因传递载体-杆状病毒系统 | 第16-18页 |
| ·HA表位标记附加技术 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| ·本研究的实验技术路线 | 第20-21页 |
| ·课题资助名称 | 第21-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-55页 |
| ·实验材料 | 第22-33页 |
| ·供试材料 | 第22页 |
| ·供试菌种和质粒 | 第22-25页 |
| ·扩增引物 | 第25-26页 |
| ·主要分子生物学及生化试剂 | 第26-27页 |
| ·主要缓冲液及试剂配制 | 第27-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-55页 |
| ·HA-F基因的克隆与鉴定 | 第33-38页 |
| ·重组转移载体的构建与鉴定 | 第38-42页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-YL的构建 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-YL转染Sf9细胞 | 第43-45页 |
| ·重组杆状病毒的扩增及滴度测定 | 第45-46页 |
| ·重组杆状病毒在CHO细胞中表达 | 第46-50页 |
| ·Gel-Pro analyzer4.5软件使用 | 第50-55页 |
| 第3章 结果与分析 | 第55-85页 |
| ·HA-F基因的制备与鉴定 | 第55-57页 |
| ·HA-F基因的制备 | 第55-56页 |
| ·YL-HA-F基因的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第57-62页 |
| ·Xba Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切鉴定pYL-LM,pYL-LM-ITRs,pYL-LM(-),pYL-SD,pYL-SD-ITRs,pYL-SD(-)结果 | 第57-60页 |
| ·PstⅠ单酶切鉴定pYL-LM,pYL-LM-ITRs,pYL-SD,pYL-SD-ITRs结果 | 第60-62页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-YL的鉴定 | 第62-65页 |
| ·重组穿梭转移载体bYL-LM,bYL-LM-ITRs,bYL-SD,bYL-SD-ITRs,bYL-LM(-),bYL-SD(-)的鉴定 | 第63-65页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-YL转染Sf9细胞 | 第65-68页 |
| ·Sf9昆虫细胞生长曲线的绘制 | 第65-66页 |
| ·Sf9昆虫细胞正常形态 | 第66页 |
| ·P1代重组杆状病毒vYL-LM,vYL-LM-ITRs,vYL-SD,vYL-SD-ITRs,vYL-LM(-),vYL-SD(-)的收获 | 第66-68页 |
| ·重组杆状病毒的扩增及滴度测定 | 第68-76页 |
| ·P1代重组杆状病毒滴度测定 | 第68-69页 |
| ·P2代重组杆状病毒滴度测定 | 第69-71页 |
| ·P3代重组杆状病毒滴度测定 | 第71-76页 |
| ·CHO-K1细胞中F蛋白的表达与鉴定 | 第76-79页 |
| ·正常CHO细胞的形态 | 第76页 |
| ·蛋白收获前CHO-K1细胞形态 | 第76-78页 |
| ·F蛋白的SDS-PAGE | 第78-79页 |
| ·F蛋白Western blot结果与分析 | 第79-84页 |
| ·F蛋白Western blot结果 | 第79-80页 |
| ·利用Gel-Pro analyzer4.5软件对Western blot结果进行分析 | 第80-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第4章 讨论 | 第85-89页 |
| ·高效价病毒的获得 | 第85-86页 |
| ·不同启动子启动的F基因在CHO细胞中表达的比较 | 第86-87页 |
| ·相同启动子下,调控元件WPRE对F蛋白在CHO细胞中表达的影响 | 第87页 |
| ·相同启动子下,调控元件ITRs对F蛋白在CHO细胞中表达的影响 | 第87页 |
| ·昆虫杆状病毒的应用 | 第87-89页 |
| 第5章 结论 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
