| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·3-羟基丁酮概述 | 第11-12页 |
| ·理化性质与用途 | 第11-12页 |
| ·微生物法生产 3-羟基丁酮的研究进展 | 第12-15页 |
| ·微生物发酵生产 3-羟基丁酮研究进展 | 第12页 |
| ·3 -羟基丁酮代谢途径解析 | 第12-13页 |
| ·国内外研究进展 | 第13-15页 |
| ·光滑球拟酵母（Candida glabrata）研究进展 | 第15-16页 |
| ·光滑球拟酵母生产优势 | 第15页 |
| ·光滑球拟酵母生产精细化学品的研究进展 | 第15-16页 |
| ·代谢工程在工业生物技术领域的应用 | 第16-19页 |
| ·代谢工程研究进展 | 第16-17页 |
| ·系统代谢工程研究进展 | 第17-19页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第19-21页 |
| ·系统代谢工程改造 C. glabrata 生产 3-羟基丁酮面临的科学问题 | 第19-20页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 构建胞质丙酮酸脱羧途径对 3-羟基丁酮合成的影响 | 第21-40页 |
| ·引言 | 第21-22页 |
| ·材料与方法 | 第22-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24-25页 |
| ·培养基和培养条件 | 第25页 |
| ·代谢物分析 | 第25-26页 |
| ·粗酶液提取与酶活测定 | 第26-27页 |
| ·分子生物学操作 | 第27-29页 |
| ·In Silico 模拟分析 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-36页 |
| ·基于 GSMM 对 3-羟基丁酮合成途径的设计 | 第29-30页 |
| ·光滑球拟酵母中丙酮酸脱羧途径的构建 | 第30-31页 |
| ·胞质丙酮酸脱羧途径的优化 | 第31-33页 |
| ·光滑球拟酵母转运 3-羟基丁酮能力的研究 | 第33-34页 |
| ·抑制竞争途径对 3-羟基丁酮合成的影响 | 第34-35页 |
| ·添加烟酸对菌株合成 3-羟基丁酮的影响 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| ·基因组规模代谢网络模型（GSMM）在代谢工程领域中的应用 | 第36-37页 |
| ·基于 GSMM 模拟预测代谢途径的问题及解决方案 | 第37-38页 |
| ·基于代谢工程策略实现对代谢途径的优化 | 第38页 |
| ·基于辅因子工程改变代谢途径的流量分布 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第三章 构建线粒体丙酮酸脱羧途径对 3-羟基丁酮合成的影响 | 第40-55页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·材料与方法 | 第41-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-44页 |
| ·试剂与仪器 | 第44页 |
| ·培养基和培养条件 | 第44页 |
| ·代谢产物分析方法 | 第44页 |
| ·分子生物学操作 | 第44页 |
| ·酵母线粒体分离与丙酮酸转运速率测定 | 第44-45页 |
| ·线粒体信号肽功能的验证 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-52页 |
| ·酿酒酵母线粒体信号肽 CoxIV 功能的验证 | 第45-47页 |
| ·构建线粒体丙酮酸脱羧途径对 3-羟基丁酮合成的影响 | 第47-51页 |
| ·过量表达线粒体丙酮酸转运蛋白（MPC）对 3-羟基丁酮积累的影响 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·亚细胞代谢工程的应用 | 第52-53页 |
| ·亚细胞代谢工程面临的技术瓶颈与挑战 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 代谢工程改造丙酮酸裂解途径对 3-羟基丁酮合成的影响 | 第55-70页 |
| ·前言 | 第55-56页 |
| ·材料与方法 | 第56-60页 |
| ·菌株与质粒 | 第56-57页 |
| ·试剂与仪器 | 第57页 |
| ·培养基和培养条件 | 第57-58页 |
| ·代谢产物分析方法 | 第58页 |
| ·分子生物学操作 | 第58-60页 |
| ·In silico 模拟分析 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-68页 |
| ·基于代谢扰动的 3-羟基丁酮关键节点的解析 | 第60-63页 |
| ·抑制竞争途径对 3-羟基丁酮合成的影响 | 第63-65页 |
| ·强化丙酮酸裂解途径对 3-羟基丁酮积累的影响 | 第65页 |
| ·基于 GSMM 对 3-羟基丁酮合成瓶颈的模拟分析 | 第65-67页 |
| ·过量表达 NADH 氧化酶(NOX)对 3-羟基丁酮形成的影响 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·代谢途径中关键代谢节点的确定 | 第68页 |
| ·代谢途径瓶颈的确定与解决 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 3-羟基丁酮对光滑球拟酵母生理功能的影响 | 第70-87页 |
| ·引言 | 第70-72页 |
| ·材料与方法 | 第72-76页 |
| ·菌株和质粒 | 第72页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第72页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第72-73页 |
| ·分析方法 | 第73-74页 |
| ·工程菌株的构建 | 第74-75页 |
| ·RT-PCR | 第75-76页 |
| ·结果 | 第76-83页 |
| ·3-羟基丁酮浓度对光滑球拟酵母生长的影响 | 第76-77页 |
| ·3-羟基丁酮浓度对 C. glabrata 生理特性的影响 | 第77-79页 |
| ·柠檬酸对 C. glabrata 抵御 3-羟基丁酮胁迫的影响 | 第79-80页 |
| ·3-羟基丁酮浓度对线粒体融合分裂的影响 | 第80-81页 |
| ·过量表达 fzo1 和 dnm1 对 C. glabrata 抵御 3-羟基丁酮胁迫的影响 | 第81页 |
| ·过量表达 fzo1 和 dnm1 对 C. glabrata 生理特性的影响 | 第81-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·有机溶剂胁迫对微生物的影响 | 第83-84页 |
| ·胞内 ROS 水平对细胞生理功能的影响 | 第84-85页 |
| ·能量代谢对微生物抵御外界环境胁迫的影响 | 第85页 |
| ·线粒体融合分裂过程对微生物抵御有机溶剂胁迫的影响 | 第85-86页 |
| ·本章小结 | 第86-87页 |
| 主要结论与展望 | 第87-89页 |
| 主要结论 | 第87-88页 |
| 展望 | 第88-89页 |
| 论文创新点 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第103页 |
