| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-19页 |
| ·角质酶概述 | 第10-13页 |
| ·角质酶的结构与功能 | 第10页 |
| ·角质酶的应用 | 第10-11页 |
| ·角质酶的制备 | 第11-13页 |
| ·大肠杆菌分泌表达重组蛋白概述 | 第13-17页 |
| ·大肠杆菌蛋白分泌系统 | 第13-16页 |
| ·强化蛋白分泌的策略 | 第16-17页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第17-19页 |
| ·立题依据及研究意义 | 第17页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 大肠杆菌 II 型分泌系统介导的角质酶的分泌表达 | 第19-31页 |
| ·引言 | 第19页 |
| ·材料和方法 | 第19-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·试剂和仪器 | 第19-20页 |
| ·培养基和培养条件 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的构建 | 第21-22页 |
| ·定点突变 | 第22页 |
| ·分析方法 | 第22页 |
| ·不同细胞组分的制备 | 第22-23页 |
| ·结果与讨论 | 第23-29页 |
| ·Sec 途径介导的角质酶的分泌表达 | 第23-24页 |
| ·Tat 途径介导的角质酶的分泌表达 | 第24-26页 |
| ·采用不同策略处理细胞促进细胞内角质酶的释放 | 第26-28页 |
| ·定点突变提高角质酶分泌性能的尝试 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 大肠杆菌 I 型分泌系统介导的角质酶的分泌表达 | 第31-42页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料和方法 | 第31-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·试剂和仪器 | 第31页 |
| ·培养基和培养条件 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·定点突变 | 第32页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第32页 |
| ·分析方法 | 第32-33页 |
| ·不同细胞组分的制备 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-41页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·角质酶-HlyAs 的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·角质酶-HlyAs 的分离纯化 | 第36-37页 |
| ·角质酶-HlyAs 的酶学性质 | 第37-38页 |
| ·角质酶-HlyAs 的应用性能—棉织物的润湿性 | 第38-39页 |
| ·重组大肠杆菌胞外表达角质酶-HlyAs 的 3 L 罐发酵 | 第39-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 无信号肽介导的角质酶的“分泌”表达 | 第42-51页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料和方法 | 第42-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·试剂和仪器 | 第42页 |
| ·培养基和培养条件 | 第42页 |
| ·重组质粒的构建 | 第42页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·分析方法 | 第43页 |
| ·不同细胞组分的制备 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-49页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·角质酶NS的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·角质酶NS的分离纯化 | 第45-46页 |
| ·角质酶NS的酶学定性 | 第46-47页 |
| ·重组大肠杆菌胞外表达角质酶NS的 3 L 罐发酵 | 第47页 |
| ·角质酶NS的基因优化及其表达 | 第47-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第五章 无信号肽介导的角质酶“分泌”机制的探究 | 第51-64页 |
| ·前言 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·试剂和仪器 | 第51页 |
| ·培养基和培养条件 | 第51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·定点突变 | 第52页 |
| ·分析方法 | 第52-53页 |
| ·不同细胞组分的制备 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-63页 |
| ·失活的角质酶NS突变体 S130A 的表达 | 第53-55页 |
| ·角质酶具有磷脂水解活性 | 第55-57页 |
| ·角质酶NS的表达对 E. coli 细胞膜具有一定的破坏作用 | 第57-58页 |
| ·角质酶NS的“分泌”属于非特异性渗漏 | 第58-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第六章 共表达角质酶促进天然分泌型蛋白的胞外表达 | 第64-77页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·材料和方法 | 第64-66页 |
| ·菌株和质粒 | 第64页 |
| ·试剂和仪器 | 第64页 |
| ·培养基和培养条件 | 第64页 |
| ·重组质粒的构建 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第65页 |
| ·分析方法 | 第65-66页 |
| ·不同细胞组分的制备 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-76页 |
| ·木聚糖酶与角质酶的共表达 | 第66-71页 |
| ·α-淀粉酶与角质酶的共表达 | 第71-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 主要结论与展望 | 第77-79页 |
| 主要结论 | 第77-78页 |
| 展望 | 第78-79页 |
| 论文主要创新点 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 附录 | 第88页 |
