| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| ·概述 | 第11-16页 |
| ·海藻糖 | 第11页 |
| ·基本结构与理化性质 | 第11-12页 |
| ·海藻糖对大分子的保护机理 | 第12-13页 |
| ·海藻糖的应用 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的生产 | 第14-16页 |
| ·海藻糖合酶及国内外研究进展 | 第16-18页 |
| ·海藻糖合酶的性质 | 第16-17页 |
| ·海藻糖合酶国内外研究进展 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统特点 | 第18页 |
| ·毕赤酵母常用菌株 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达优点 | 第19页 |
| ·课题研究背景及内容 | 第19-21页 |
| ·立题背景 | 第19-20页 |
| ·课题研究主要思路 | 第20-21页 |
| 第2章 重组表达载体的构建 | 第21-39页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料与设备 | 第21-23页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·实验试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·海藻糖合酶信号肽预测 | 第23-24页 |
| ·海藻糖合酶基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·pPICZαA 质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·0.8%琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26页 |
| ·PCR 产物和 pPICZαA 双酶切与切胶回收 | 第26-28页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·重组表达载体的构建和转化 | 第28-30页 |
| ·重组子筛选 | 第30页 |
| ·DNA 序列测定和分析 | 第30-31页 |
| ·结果和讨论 | 第31-37页 |
| ·信号肽预测结果 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·海藻糖合酶基因的扩增 | 第33页 |
| ·重组子 PCR 筛选验证 | 第33-34页 |
| ·重组载体酶切鉴定 | 第34-36页 |
| ·DNA 序列测定和分析 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-39页 |
| 第3章 海藻糖合酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第39-55页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料与设备 | 第40-42页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·重组表达载体的提取、线性化与纯化 | 第42-43页 |
| ·毕赤酵母 GS115 感受态制备与转化 | 第43页 |
| ·毕赤酵母基因组 DNA 提取 | 第43-44页 |
| ·高拷贝转化子的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·转化子表型鉴定 | 第45页 |
| ·阳性转化子诱导表达与 SDS-PAGE 电泳检测 | 第45-46页 |
| ·重组海藻糖合酶酶活测定 | 第46页 |
| ·结果和讨论 | 第46-53页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第46-47页 |
| ·重组毕赤酵母基因组 DNA 提取 | 第47-48页 |
| ·重组毕赤酵母 PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·重组毕赤酵母表型鉴定 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 检测重组蛋白 | 第48-49页 |
| ·重组海藻糖合酶酶活测定 | 第49-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 重组毕赤酵母发酵条件优化 | 第55-65页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·实验材料与设备 | 第55-57页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55-56页 |
| ·主要生化试剂 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·摇瓶发酵 | 第57页 |
| ·最佳诱导时间对蛋白分泌表达的影响 | 第57页 |
| ·甲醇浓度对蛋白分泌表达的影响 | 第57-58页 |
| ·诱导温度对蛋白分泌表达的影响 | 第58页 |
| ·诱导 pH 对蛋白分泌表达的影响 | 第58页 |
| ·装液量对蛋白分泌表达的影响 | 第58页 |
| ·发酵罐上培养对蛋白分泌表达的影响 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-64页 |
| ·诱导时间对蛋白分泌表达的影响 | 第59-60页 |
| ·甲醇浓度等对蛋白分泌表达的影响 | 第60-61页 |
| ·罐上发酵对蛋白分泌表达的影响 | 第61-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第5章 结论和展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 在学期间发表学术论文 | 第73页 |