| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1 泛素-蛋白酶体降解途径 | 第15-17页 |
| ·泛素系统 | 第15-16页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径的研究进展 | 第16页 |
| ·去泛素化酶(DUB) | 第16-17页 |
| 2 OTU 基因国内外研究现状 | 第17-18页 |
| 3 棉花黄萎菌与真菌病毒 VDCV1 的研究概述 | 第18页 |
| 4 农杆菌介导的真菌遗传转化（ATM）及大丽轮枝菌的遗传转化 | 第18-20页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化的研究进展 | 第18-19页 |
| ·大丽轮枝菌的遗传转化 | 第19-20页 |
| 5 植物病毒载体表达外源蛋白 | 第20-22页 |
| ·植物病毒载体 | 第20-21页 |
| ·黄瓜花叶病毒（CMV） | 第21页 |
| ·狗尾草花叶病毒（FoMV） | 第21-22页 |
| 6 研究内容及意义 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第22页 |
| ·OTU 基因对病毒稳定性的影响 | 第22页 |
| ·转基因黄萎菌研究 | 第22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 OTU 基因对病毒侵染本氏烟的影响 | 第23-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·酶与试剂 | 第23页 |
| 2 PCB301-FOMV-OTUP193 载体构建及 PCB301-CMV-Δ2B-OTUP193 载体构建 | 第23-34页 |
| ·目的片段 PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR 片段清洁回收 | 第24-25页 |
| ·载体及重叠 PCR 片段酶切 | 第25-26页 |
| ·载体及 PCR 片段连接 | 第26页 |
| ·连接产物进行化学转化 | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第27页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的农杆菌转化 | 第28-29页 |
| ·农杆菌 GV3101 感受态的制备 | 第28页 |
| ·阳性克隆转化农杆菌 | 第28页 |
| ·农杆菌菌液 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第29页 |
| ·植物 total RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·PT-PCR 检测 | 第30-31页 |
| ·Northern Blot 检测 | 第31-32页 |
| ·Western Blot 检测 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-44页 |
| ·pCB301-FoMV-OTUp193 载体构建及转化农杆菌 | 第34-36页 |
| ·片段 PCR 扩增的结果 | 第34页 |
| ·pCB301-FoMV-OTUp193 阳性克隆 PCR 检测和酶切检测 | 第34-35页 |
| ·pCB301-FoMV-OTUp193 转化 GV3101 农杆菌的 PCR 检测结果 | 第35-36页 |
| ·pCB301-F209-Δ2b-OTUp193 载体的构建结果 | 第36-38页 |
| ·PCR 扩增的结果 | 第36-37页 |
| ·pCB301- F209-Δ2b -OTUp193 阳性克隆 PCR 检测和酶切检测 | 第37-38页 |
| ·pCB301- F209-Δ2b -OTUp193 转化 GV3101 农杆菌的 PCR 检测结果 | 第38页 |
| ·VdCV1 的 OTU 基因增强 FoMV 的 RdRp 的稳定性 | 第38-40页 |
| ·OTU 基因降低烟草植物的免疫力 | 第40页 |
| ·VdCV1 的 OTU 基因增强病毒 FoMV-GFP 的复制 | 第40-42页 |
| ·VdCV1 的 OTU 基因对 CMV 复制的影响 | 第42-44页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 转基因黄萎菌研究 | 第46-70页 |
| 1 材料与试剂 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·酶与试剂 | 第46页 |
| 2 以 PHMG 为骨架的重组表达载体 PHMG-OTU 和 PHMG-OTUP193 的构建 | 第46-51页 |
| ·克隆片段 PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·PCR 片段割胶回收 | 第47页 |
| ·载体及重叠 PCR 片段酶切 | 第47-48页 |
| ·载体及 PCR 片段连接 | 第48页 |
| ·连接产物进行化学转化到大肠杆菌 DH5α | 第48页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第49页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第49页 |
| ·阳性克隆的农杆菌转化 | 第49-50页 |
| ·农杆菌 AGL-1 感受态的制备 | 第49页 |
| ·阳性克隆转化农杆菌 | 第49-50页 |
| ·农杆菌菌液 PCR 鉴定 | 第50页 |
| ·ATM 法真菌遗传转化 | 第50页 |
| ·SDS-CTAB 法提真菌基因组 | 第50-51页 |
| ·酚抽提法提取真菌总蛋白 | 第51页 |
| ·真菌总蛋白 Western Blot | 第51页 |
| 3 以 PBHT1 为载体的重组表达载体构建 | 第51-54页 |
| ·目的片段 PCR 扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR 片段清洁回收 | 第52页 |
| ·载体及 PCR 片段酶切 | 第52-53页 |
| ·载体及 PCR 片段连接 | 第53页 |
| ·连接产物进行化学转化到大肠杆菌 DH5α | 第53页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第53-54页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第54页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第54页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第54页 |
| ·阳性克隆的农杆菌转化 | 第54页 |
| ·ATM 法真菌遗传转化 | 第54页 |
| ·SDS-CTAB 法提真菌基因组 | 第54页 |
| ·PCR 鉴定 | 第54页 |
| 4 结果及分析 | 第54-68页 |
| ·pHMG-OTU 和 pHMG-OTUp193 的构建及转化子分析结果 | 第54-62页 |
| ·目的片段 PCR 扩增结果 | 第54-55页 |
| ·载体和目的片段酶切结果 | 第55-56页 |
| ·pHMG-OTU 和 pHMG-OTUp193 阳性克隆 PCR 鉴定和酶切鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·阳性克隆转化 AGL-1 农杆菌 | 第57页 |
| ·pHMG、pHMG-OTU、pHMG-OTUp193 转化棉花黄萎菌 T-9 的转化子 | 第57-58页 |
| ·转化子的荧光检测鉴定 | 第58-59页 |
| ·pHMG、pHMG-OTU、pHMG-OTUp193 转化子菌株的 PCR 鉴定结果 | 第59-61页 |
| ·转基因真菌总蛋白提取结果及 Western Blot 结果 | 第61-62页 |
| ·以 pBHt1 载体为骨架的重组表达载体的构建及转化子分析结果 | 第62-68页 |
| ·目的片段 PCR 扩增结果 | 第62-63页 |
| ·阳性克隆质粒和鉴定结果 | 第63-65页 |
| ·pBGFP 和 pBOTU 转化 AGL-1 农杆菌的 PCR 检测结果 | 第65-66页 |
| ·pBHt1、pBGFP 和 pBOTU 转化黄萎菌 T-9 结果 | 第66-68页 |
| 5 本章小结与讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录：重要溶剂配制 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士研究生期间的成果 | 第78页 |
