| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| ·相关病原简介 | 第14-17页 |
| ·猪圆环病毒 | 第14-15页 |
| ·猪细小病毒 | 第15页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合症病毒 | 第15-16页 |
| ·猪瘟病毒 | 第16页 |
| ·日本脑炎病毒 | 第16-17页 |
| ·伪狂犬病毒 | 第17页 |
| ·相关病原的诊断技术 | 第17-23页 |
| ·病毒分离培养 | 第17-18页 |
| ·免疫学和血清学方法 | 第18-19页 |
| ·免疫过氧化物酶单层检测 | 第18页 |
| ·免疫荧光试验 | 第18页 |
| ·酶联免疫吸附测定 | 第18-19页 |
| ·血清中和试验 | 第19页 |
| ·分子生物学技术 | 第19-23页 |
| ·核酸探针杂交技术 | 第19页 |
| ·环介导核酸恒温扩增技术 | 第19-20页 |
| ·DNA 芯片技术 | 第20页 |
| ·PCR 技术 | 第20-23页 |
| 第二章 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 同时检测六种猪病毒研究的实验方案设计 | 第23-26页 |
| ·实验目的和意义 | 第23页 |
| ·实验主要内容 | 第23-25页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·标准品构建 | 第24页 |
| ·六种猪病毒单重实时荧光 PCR 体系的优化和建立 | 第24页 |
| ·多重实时荧光 PCR 体系同时检测六种猪病毒的优化和建立 | 第24-25页 |
| ·实验流程 | 第25-26页 |
| 第三章 六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 方法的建立 | 第26-46页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·毒源 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·核酸提取及反转录 | 第28-32页 |
| ·病毒 DNA 提取 | 第28页 |
| ·总 RNA 提取 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR 及 PCR 反应 | 第29页 |
| ·PCR 产物割胶回收 | 第29-30页 |
| ·PCR 目的片段连接 | 第30页 |
| ·连接产物转化 | 第30页 |
| ·重组质粒提取 | 第30-31页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒标准品制备 | 第31-32页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 方法的建立 | 第32-33页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 的扩增产物 Tm 值 | 第32页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 特异性 | 第32页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 标准曲线制作 | 第32页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 重复性 | 第32-33页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 灵敏度 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-44页 |
| ·标准品构建 | 第33-34页 |
| ·六种猪病毒重组质粒 PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·六种猪病毒重组质粒测序 | 第35-36页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 扩增产物 Tm 值 | 第36页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 特异性 | 第36-37页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 标准曲线制作 | 第37-40页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 重复性 | 第40-42页 |
| ·六种猪病毒 EvaGreen 单重实时荧光 PCR 灵敏度 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 检测六种猪病毒方法的建立 | 第46-59页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·毒源 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·六种猪病毒扩增产物在多重熔解曲线上 Tm 值 | 第47页 |
| ·EvaGreen 多重实时荧光 PCR 检测六种猪病毒特异性 | 第47页 |
| ·EvaGreen 多重实时荧光 PCR 检测六种猪病毒稳定性 | 第47-48页 |
| ·单个病毒 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 灵敏度 | 第48页 |
| ·单个病毒 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 标准曲线制作 | 第48页 |
| ·多种病毒 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 灵敏度 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-55页 |
| ·六种病毒扩增产物在多重熔解曲线上 Tm 值 | 第49页 |
| ·EvaGreen 多重实时荧光 PCR 检测六种猪病毒特异性 | 第49-50页 |
| ·EvaGreen 多重实时荧光 PCR 检测六种猪病毒稳定性 | 第50-51页 |
| ·单个病毒 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 灵敏度 | 第51-53页 |
| ·单个病毒 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 标准曲线 | 第53-54页 |
| ·多种病毒 EvaGreen 多重实时荧光 PCR 灵敏度 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-59页 |
| 第五章 EvaGreen 多重实时荧光定量 PCR 方法检测临床样品 | 第59-64页 |
| ·临床样品 | 第59页 |
| ·样品核酸提取 | 第59-60页 |
| ·血清样品核酸提取 | 第59页 |
| ·组织样品核酸提取 | 第59-60页 |
| ·反转录合成 cDNA | 第60页 |
| ·临床样品检测 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 结论与展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
