| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1-1 明串珠菌概述 | 第10-13页 |
| 1-1-1 明串珠菌的特征及分类 | 第10页 |
| 1-1-2 明串珠菌的糖代谢 | 第10-12页 |
| 1-1-3 明串珠菌的柠檬酸代谢 | 第12-13页 |
| 1-1-4 明串珠菌的应用 | 第13页 |
| 1-1-4-1 明串珠菌在乳品技术中的应用 | 第13页 |
| 1-1-4-2 明串珠菌在功能性食品中的应用 | 第13页 |
| 1-1-4-3 明串珠菌在基因工程中的应用 | 第13页 |
| 1-2 基因失活 | 第13-16页 |
| 1-2-1 基因失活的定义 | 第13-14页 |
| 1-2-2 基因失活的步骤和策略 | 第14-15页 |
| 1-2-2-1 基因失活的步骤 | 第14页 |
| 1-2-2-2 基因失活的策略 | 第14-15页 |
| 1-2-3 基因失活的应用 | 第15-16页 |
| 1-2-3-1 基因失活在微生物育种方面的应用 | 第15页 |
| 1-2-3-2 基因失活在代谢工程方面的应用 | 第15-16页 |
| 1-3 电击转化 | 第16-18页 |
| 1-3-1 电击转化的原理 | 第16页 |
| 1-3-2 影响电击转化的因素 | 第16-18页 |
| 1-3-2-1 细胞生长状态 | 第16-17页 |
| 1-3-2-2 细胞壁弱化方式 | 第17页 |
| 1-3-2-3 电击缓冲液 | 第17页 |
| 1-3-2-4 电击参数 | 第17页 |
| 1-3-2-5 细胞复苏时间 | 第17-18页 |
| 1-4 研究的目的意义和内容 | 第18-20页 |
| 1-4-1 研究的目的意义 | 第18页 |
| 1-4-2 研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 明串珠菌电击转化的优化 | 第20-30页 |
| 2-1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2-1-1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2-1-2 培养基和缓冲液 | 第20-21页 |
| 2-1-2-1 培养基 | 第20-21页 |
| 2-1-2-2 缓冲液 | 第21页 |
| 2-1-3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2-1-4 实验仪器 | 第22页 |
| 2-2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2-2-1 pCW4质粒的提取 | 第22-23页 |
| 2-2-2 明串珠菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2-2-2-1 生长状态 | 第23页 |
| 2-2-2-2 细胞壁弱化方式 | 第23页 |
| 2-2-3 电击转化 | 第23-24页 |
| 2-2-4 细胞复苏 | 第24页 |
| 2-3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2-3-1 pCW4质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2-3-2 明串珠菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2-3-2-1 细胞生长状态 | 第25页 |
| 2-3-2-2 细胞壁弱化方式 | 第25页 |
| 2-3-3 电击转化 | 第25-27页 |
| 2-3-3-1 电击缓冲液 | 第26页 |
| 2-3-3-2 电场强度 | 第26页 |
| 2-3-3-3 电阻 | 第26-27页 |
| 2-3-3-4 细胞复苏时间 | 第27页 |
| 2-4 讨论 | 第27-28页 |
| 2-5 小结 | 第28-30页 |
| 第三章 明串珠菌ALDH基因同源重组载体的构建 | 第30-44页 |
| 3-1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3-1-1 菌株与质粒 | 第30页 |
| 3-1-2 培养基 | 第30页 |
| 3-1-3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 3-1-4 实验仪器 | 第31页 |
| 3-2 实验方法 | 第31-38页 |
| 3-2-1 ALDH基因的克隆 | 第32-35页 |
| 3-2-1-1 明串珠菌基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 3-2-1-2 ALDH基因序列的扩增 | 第32-33页 |
| 3-2-1-3 PCR产物纯化 | 第33-34页 |
| 3-2-1-4 质粒重组 | 第34-35页 |
| 3-2-1-5 筛选阳性重组子 | 第35页 |
| 3-2-1-6 测序 | 第35页 |
| 3-2-2 中间载体pTA2-ErmAM的构建 | 第35-36页 |
| 3-2-2-1 质粒pCS1966的提取 | 第35页 |
| 3-2-2-2 ErmAM基因的克隆 | 第35页 |
| 3-2-2-3 PCR产物纯化 | 第35页 |
| 3-2-2-4 质粒重组 | 第35-36页 |
| 3-2-2-5 阳性重组子的筛选 | 第36页 |
| 3-2-2-6 测序 | 第36页 |
| 3-2-3 同源重组载体的构建 | 第36-38页 |
| 3-2-3-1 ALDH基因的提取 | 第36页 |
| 3-2-3-2 L-ALDH和R-ALDH基因的克隆 | 第36-37页 |
| 3-2-3-3 PCR产物的纯化 | 第37页 |
| 3-2-3-4 质粒重组 | 第37-38页 |
| 3-3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3-3-1 ALDH基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3-3-1-1 明串珠菌基因组DNA提取结果 | 第38-39页 |
| 3-3-1-2 ALDH基因的克隆 | 第39页 |
| 3-3-1-3 阳性重组子的筛选 | 第39页 |
| 3-3-2 中间载体pTA2-ErmAM的构建 | 第39-40页 |
| 3-3-2-1 ErmAM基因的克隆 | 第39页 |
| 3-3-2-2 阳性重组子的筛选 | 第39-40页 |
| 3-3-3 基因失活载体的构建 | 第40-41页 |
| 3-3-3-1 L-ALDH和R-ALDH基因的克隆 | 第40-41页 |
| 3-3-3-2 质粒重组 | 第41页 |
| 3-4 讨论 | 第41-42页 |
| 3-5 小结 | 第42-44页 |
| 第四章 突变菌株生理生化特性的检测 | 第44-54页 |
| 4-1 突变菌株的筛选与鉴定 | 第44-46页 |
| 4-1-1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4-1-1-1 实验菌株 | 第44页 |
| 4-1-1-2 培养基 | 第44页 |
| 4-1-1-3 实验试剂 | 第44页 |
| 4-1-1-4 实验仪器 | 第44-45页 |
| 4-1-2 实验方法 | 第45页 |
| 4-1-2-1 同源重组的方式 | 第45页 |
| 4-1-2-2 同源重组子的验证 | 第45页 |
| 4-1-3 实验结果 | 第45-46页 |
| 4-1-3-1 同源重组的方式 | 第45页 |
| 4-1-3-2 同源重组子的验证 | 第45-46页 |
| 4-2 突变菌株发酵产物的检测 | 第46-50页 |
| 4-2-1 实验材料 | 第46-47页 |
| 4-2-1-1 实验菌株 | 第46页 |
| 4-2-1-2 培养基 | 第46页 |
| 4-2-1-3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4-2-1-4 实验仪器 | 第47页 |
| 4-2-2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4-2-2-1 培养方法 | 第47页 |
| 4-2-2-2 发酵产物的测定 | 第47-49页 |
| 4-2-3 实验结果 | 第49-50页 |
| 4-3 讨论 | 第50-52页 |
| 4-4 小结 | 第52-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录A | 第62-63页 |
| 附录B | 第63-64页 |
| 攻读学位期间所取得的相关科研成果 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |