| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 启动子概述 | 第11-14页 |
| ·启动子的分类 | 第11页 |
| ·核心启动子调控元件的结构 | 第11-12页 |
| ·其它重要调控元件的结构 | 第12-14页 |
| 2 启动子的研究方法 | 第14-17页 |
| ·基于常规试验的研究方法 | 第14-16页 |
| ·启动子序列的克隆方法 | 第14-15页 |
| ·启动子功能的分析方法 | 第15-16页 |
| ·基于生物信息学理论的启动子分析方法 | 第16-17页 |
| 3 myoz1及tnnc2启动子研究现状 | 第17-18页 |
| ·myoz1启动子研究现状 | 第17-18页 |
| ·tnnc2启动子的研究现状 | 第18页 |
| 4 PPARγ的概述 | 第18-19页 |
| 5 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-39页 |
| 1 试验材料 | 第20-24页 |
| ·DNA样品 | 第20页 |
| ·载体和菌株 | 第20-22页 |
| ·试剂及其配置 | 第22-24页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·试剂的配置 | 第22-24页 |
| ·主要数据库及分析软件 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-39页 |
| ·猪myoz1和tnnc2基因启动子的克隆及重组表达质粒的构建 | 第24-29页 |
| ·猪myoz1和tnnc2调控序列的获得 | 第24页 |
| ·转录因子结合位点的分析及缺失片段设计 | 第24-26页 |
| ·PCR扩增产物的检测和回收 | 第26-27页 |
| ·PCR产物及pGL3-basic载体双酶切及回收 | 第27页 |
| ·pGL3-basic缺失重组表达质粒的构建 | 第27-29页 |
| ·细胞培养及诱导分化 | 第29-30页 |
| ·细胞的复苏 | 第29页 |
| ·细胞的常规培养 | 第29-30页 |
| ·细胞冻存 | 第30页 |
| ·C2C12细胞的诱导分化 | 第30页 |
| ·细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第30-32页 |
| ·细胞的转染 | 第30-31页 |
| ·双荧光素酶相对活性的检测 | 第31页 |
| ·数据的处理及分析 | 第31-32页 |
| ·pEGFP-N1重组表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白表达的观测 | 第33页 |
| ·核心启动子与PPARγ基因的重组构建 | 第33-34页 |
| ·猪PPARγ基因CDS区域的克隆 | 第33-34页 |
| ·猪PPARγ重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·C2C12细胞的PPARγ表达量测定 | 第34-38页 |
| ·C2C12细胞RNA的提取及反转录 | 第34-36页 |
| ·定量PCR分析PPARγ在C2C12细胞中的表达量 | 第36-37页 |
| ·C2C12细胞蛋白质的提取 | 第37页 |
| ·Western blot检测PPARγ蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·PPARγ重组表达质粒的线性化 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-60页 |
| 1 猪myoz1和tnnc2启动子功能分析及验证 | 第39-54页 |
| ·猪myoz1和tnnc2启动子的生物信息学分析 | 第39-45页 |
| ·MEME分析猪myoz1和tnnc2调控区域 | 第39-40页 |
| ·调控区域转录因子结合位点的预测 | 第40-45页 |
| ·猪myoz1和tnnc2启动子的克隆及缺失重组质粒的构建 | 第45-47页 |
| ·C2C12细胞的诱导分化 | 第47-48页 |
| ·猪myoz1和tnnc2启动子及缺失重组质粒的双荧光素酶活性检测 | 第48-53页 |
| ·pEGFP-N1重组质粒的构建及绿色荧光蛋白的检测 | 第53-54页 |
| 2 猪PPARγ表达载体的构建及表达量的测定 | 第54-60页 |
| ·猪PPARγ表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·定量PCR检测C2C12细胞中PPARγ的表达量 | 第56-57页 |
| ·western blot检测PPARγ蛋白的表达 | 第57-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-66页 |
| 1 进化印记法分析启动子 | 第60-61页 |
| 2 猪myoz1及tnnc2启动子在小鼠C2C12、分化后的C2C12、3T3-L1细胞中的活性分析 | 第61-62页 |
| 3 tnnc2启动子可能存在的一段增强子序列 | 第62-63页 |
| 4 MEF-2、MyoD影响myoz1及tnnc2的启动子活性 | 第63-64页 |
| 5 增强启动子活性以提高外源PPARγ的表达 | 第64-66页 |
| 第五章 小结 | 第66-68页 |
| 1 本研究取得的成果 | 第66-67页 |
| 2 下一步工作计划 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录一：猪myoz1基因核心启动子序列 | 第75-76页 |
| 附录二：猪tnnc2基因核心启动子序列 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
