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条锈菌与小麦互作中效应蛋白及诱导寄主细胞坏死基因的鉴定与功能分析

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-16页
第一章 文献综述第16-43页
   ·植物与病原菌互作第16-24页
     ·植物与病原菌互作的“中心法则”第16-19页
     ·“基因对基因”假说第19页
     ·植物抗病基因的结构与功能第19-21页
     ·病原菌无毒基因的结构与功能第21-23页
     ·R 基因与 Avr 基因的互作第23-24页
   ·病原菌效应蛋白(Effector)研究进展第24-33页
     ·病原菌效应蛋白筛选方法第24-28页
     ·病原菌效应蛋白作用机制研究第28-31页
     ·病原菌效应蛋白转运机制研究第31-33页
   ·病原菌激发子研究进展第33-36页
   ·腺苷酸转移酶(adenine nucleotide tranlocase,ANT)研究进展第36-40页
     ·ANT 是线虫细胞凋亡机制的重要成员第37-38页
     ·ANT 是哺乳动物细胞凋亡机制的重要成员第38-39页
     ·ANT 在酵母中参与细胞凋亡调控第39页
     ·真菌细胞凋亡中的研究进展第39-40页
   ·植物类病变(lesion mimic)研究进展第40-42页
   ·研究目的与意义第42-43页
第二章 小麦条锈菌效应蛋白的鉴定与功能分析第43-76页
   ·引言第43-44页
   ·试验材料第44-45页
     ·植物材料、小麦条锈菌菌种和工程菌株第44页
     ·载体材料第44页
     ·试剂第44-45页
   ·试验方法第45-53页
     ·小麦条锈菌的繁殖与收集第45页
     ·小麦条锈菌夏孢子萌发与样品采集第45页
     ·小麦条锈菌夏孢子基因组 DNA 提取第45页
     ·小麦条锈菌夏孢子、萌发孢子及被侵染叶片总 RNA 的提取及纯化第45-46页
     ·生物信息学分析小麦条锈菌分泌蛋白第46页
     ·分泌蛋白的克隆第46-48页
     ·抑制 BAX 诱导的 PCD 的效应蛋白筛选第48-49页
     ·候选效应蛋白序列分析第49页
     ·候选效应蛋白信号肽分泌功能的验证第49-50页
     ·候选效应蛋白表达特征分析第50-51页
     ·候选效应蛋白在小麦条锈菌不同毒性的生理小种间序列差异分析第51页
     ·候选效应蛋白毒性 motif 分析第51页
     ·候选效应蛋白作用位点分析第51-52页
     ·效应蛋白负责转运的结构域分析第52页
     ·利用细菌三型分泌系统(TTSS)在小麦中表达效应蛋白第52-53页
   ·结果与分析第53-73页
     ·小麦条锈菌基因组中分泌蛋白的筛选与克隆第53页
     ·农杆菌侵染烟草筛选抑制 BAX 诱导 PCD 的效应蛋白第53-55页
     ·条锈菌效应蛋白基因序列分析第55-56页
     ·条锈菌效应蛋白信号肽分泌功能验证第56-57页
     ·效应蛋白基因表达特征分析第57-59页
     ·小麦条锈菌效应蛋白基因多态性分析第59-61页
     ·效应蛋白毒性结构域分析第61-64页
     ·效应蛋白亚细胞定位第64-66页
     ·效应蛋白转运结构域分析第66-70页
     ·效应蛋白抑制寄主的防御反应第70-71页
     ·效应蛋白无毒性分析第71-73页
   ·讨论第73-76页
第三章 小麦条锈菌激发子 Pst322 的鉴定与功能分析第76-100页
   ·引言第76-77页
   ·试验材料第77页
     ·植物材料、小麦条锈菌菌种和工程菌株第77页
     ·载体材料第77页
     ·试剂第77页
   ·试验方法第77-84页
     ·小麦条锈菌的繁殖与收集第77页
     ·小麦条锈菌夏孢子萌发与样品采集第77-78页
     ·小麦条锈菌吸器分离提取第78页
     ·小麦条锈菌夏孢子基因组 DNA 提取第78页
     ·小麦条锈菌夏孢子、萌发孢子、吸器及被侵染叶片总 RNA 的提取及纯化第78-79页
     ·Pst322 基因的分离与克隆第79页
     ·生物信息学分析 Pst322 编码蛋白第79页
     ·表达模式分析第79页
     ·信号肽分泌功能验证第79页
     ·通过农杆菌侵染在烟草中、拟南芥中瞬时表达 Pst322第79-80页
     ·农杆菌侵染在烟草中瞬时表达 Pst322 缺失突变体第80页
     ·通过基因枪轰击在烟草中瞬时表达 Pst322第80-81页
     ·基因枪轰击在小麦和大麦中瞬时表达 Pst322第81-84页
   ·结果与分析第84-97页
     ·Pst322 基因的克隆与结构分析第84页
     ·Pst322 基因在不同锈菌及其他植物病原菌中不保守第84-85页
     ·Pst322 基因在小麦条锈菌不同生理小种间的多态性第85-86页
     ·Pst322 基因信号肽具有分泌功能第86页
     ·Pst322 基因在条锈菌侵染过程中诱导表达第86-87页
     ·瞬时表达 Pst322 基因在寄主植物中诱导细胞坏死第87-90页
     ·Pst322 基因在条锈菌非寄主植物中导细胞坏死第90-92页
     ·Pst322 基因功能结构域分析第92-93页
     ·HIGS 沉默 Pst322 基因抑制病原菌的发育第93-97页
   ·讨论第97-100页
第四章 小麦条锈菌腺苷酸转位酶 PsANT 的鉴定与功能分析第100-120页
   ·引言第100-101页
   ·试验材料第101页
     ·植物材料、小麦条锈菌菌种和工程菌株第101页
     ·载体材料第101页
   ·试验方法第101-104页
     ·小麦条锈菌的繁殖与收集第101页
     ·小麦条锈菌夏孢子萌发与样品采集第101页
     ·小麦条锈菌夏孢子、萌发孢子及被侵染叶片总 RNA 的提取及纯化第101页
     ·PsANT 基因的分离与克隆第101页
     ·生物信息学分析 PsANT 编码蛋白第101-102页
     ·表达模式分析第102页
     ·基因枪轰击在烟草中瞬时表达 PsANT第102页
     ·PsANT 功能结构域分析第102页
     ·基因枪轰击在小麦中瞬时表达 PsANT第102页
     ·在酵母中表达 PsANT第102-103页
     ·PsANT 在小麦与条锈菌互作中免疫胶体金定位第103-104页
     ·利用 host-induced gene silencing(HIGS)沉默 PsANT第104页
   ·结果与分析第104-117页
     ·PsANT 基因的克隆与编码蛋白的结构分析第104-106页
     ·PsANT 多序列比对与进化树分析第106-107页
     ·PsANT 蛋白定位于小麦条锈菌线粒体第107-109页
     ·PsANT 在烟草细胞中过表达诱导细胞坏死第109页
     ·PsANT 三个结构域对细胞坏死的作用第109-111页
     ·PsANT 在小麦细胞中过表达诱导细胞坏死第111页
     ·PsANT 在酵母中过表达诱导细胞坏死第111-112页
     ·PsANT 在小麦条锈菌侵染过程中诱导表达第112页
     ·HIGS 沉默 PsANT 基因抑制病原菌的发育第112-117页
   ·讨论第117-120页
第五章 小麦叶片坏死斑点基因在小麦细胞坏死及抗条锈病中的功能分析第120-142页
   ·引言第120页
   ·试验材料第120页
   ·试验方法第120-124页
     ·小麦条锈菌的繁殖与收集第120-121页
     ·样品采集及小麦叶片总 RNA 的提取及纯化第121页
     ·TaLls1 基因的分离与克隆第121页
     ·生物信息学分析 TaLls1 编码蛋白第121页
     ·表达模式分析第121页
     ·基因枪轰击在烟草中瞬时表达 TaLls1第121-122页
     ·TaLls1 功能结构域分析第122页
     ·基因枪轰击在小麦中瞬时表达 TaLls1第122页
     ·利用 virus induced gene silencing(VIGS)沉默 TaLls1第122-123页
     ·叶绿素代谢产物分析第123-124页
   ·结果与分析第124-139页
     ·TaLls1 基因的克隆与编码蛋白的结构分析第124页
     ·TaLls1 多序列比对与进化树分析第124页
     ·TaLls1 在小麦不同组织中表达第124页
     ·TaLls1 在伤害、脱落酸和条锈菌处理后上调表达第124-128页
     ·TaLls1 沉默增强小麦对毒性条锈菌生理小种的抗性第128-133页
     ·TaLls1 沉默诱导小麦细胞坏死第133-135页
     ·在烟草和小麦中过表达 TaLls1 诱导细胞坏死第135-137页
     ·TaLls1 沉默植株中 Pa 积累及过表达植株中 RCC 积累均可引致细胞坏死第137-139页
   ·讨论第139-142页
第六章 结论及创新点第142-144页
参考文献第144-160页
附录第160-165页
致谢第165-166页
个人简介第166-167页

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