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杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌筛选及特性研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
缩略语表第11-13页
1 文献综述第13-28页
   ·甘薯茎线虫病及其防治第13-19页
     ·引言第13-14页
     ·甘薯茎线虫病的发生与分布第14-15页
     ·甘薯茎线虫的生物学特性第15页
     ·甘薯茎线虫的侵染机制和危害症状第15-16页
     ·植物寄生线虫的综合防治第16-19页
       ·化学防治第16-17页
       ·物理防治第17页
       ·生物防治第17-19页
   ·苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因的表达调控第19-23页
     ·苏云金芽胞杆菌简介第19页
     ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白及其编码基因第19-20页
     ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的表达调控第20-22页
       ·转录水平的调控第21页
       ·转录后水平的调控第21-22页
       ·翻译后水平的调控第22页
     ·影响cry基因表达的几个其他因素第22-23页
       ·基因拷贝数第22-23页
       ·cry基因之间的协同作用第23页
       ·宿主细胞的影响第23页
   ·苏云金芽胞杆菌防治植物寄生线虫研究进展第23-27页
     ·苏云金芽胞杆菌对植物寄生线虫的杀虫活性第23-24页
     ·苏云金芽胞杆菌的杀线虫基因和产物第24-25页
     ·苏云金芽胞杆菌对线虫的作用机制第25-27页
       ·苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白对昆虫的作用机制第25-26页
       ·苏云金芽胞杆菌晶体蛋白对线虫的作用机制研究第26-27页
   ·研究的目的和意义第27-28页
2 材料和方法第28-38页
   ·实验材料第28-30页
     ·菌株来源第28-29页
     ·PCR引物第29-30页
     ·培养基第30页
     ·抗生素及使用浓度第30页
     ·供试线虫第30页
   ·试剂和仪器第30-32页
     ·试剂第30页
     ·常用缓冲液和溶液第30-31页
     ·仪器第31-32页
   ·实验方法第32-38页
     ·供试苏云金芽胞杆菌的培养第32页
     ·苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的SDS-PAGE第32页
       ·电泳样品的制备第32页
       ·晶体蛋白的SDS-PAGE第32页
     ·苏云金芽胞杆菌生物测定样品的制备第32-33页
     ·晶体蛋白样品的浓度测定第33页
     ·甘薯茎线虫的接种、培养和收集第33-34页
       ·甘薯茎线虫的接种和培养第33页
       ·甘薯茎线虫的收集第33-34页
     ·对甘薯茎线虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌筛选第34页
       ·初筛第34页
       ·复筛第34页
     ·DNA操作方法第34-35页
       ·大肠杆菌质粒的抽提第34-35页
       ·苏云金芽胞杆菌质粒的抽提第35页
     ·DNA的体外重组操作第35-38页
       ·PCR扩增操作第35页
       ·酶切反应第35-36页
       ·连接反应第36页
       ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备与热激转化第36页
       ·BMB171感受态细胞的制备和电转化第36-38页
3 结果与分析第38-56页
   ·甘薯茎线虫的接种、培养和收集第38-39页
   ·对甘薯茎线虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌筛选第39-44页
     ·苏云金芽胞杆菌供试菌株第39-41页
     ·供试苏云金芽胞杆菌的初筛第41-43页
     ·供试苏云金芽胞杆菌的复筛第43页
     ·YBT-008对甘薯茎线虫的LC_(50)测定第43-44页
   ·YBT-008杀虫晶体蛋白基因的鉴定和验证第44-49页
     ·YBT-008的生物学特性第44-45页
     ·YBT-008晶体蛋白的SDS-PAGE第45-46页
     ·YBT-008的LC-MS及结果分析第46页
     ·YBT-008杀虫晶体蛋白基因的PCR验证第46-49页
   ·YBT-008杀虫晶体蛋白基因的克隆与表达第49-54页
     ·cyt2Ba、cry11Aa、cry4Aa和cry4Ba重组表达载体的构建第50-52页
       ·cyt2Ba、cry11Aa、cry4Aa和cry4Ba全长编码序列的PCR扩增第51-52页
       ·cyt2Ba、cry11Aa、cry4Aa和cry4Ba与pHT304载体的连接第52页
     ·重组载体的表达验证第52-54页
   ·重组表达蛋白对甘薯茎线虫的杀虫活性验证第54-56页
4 讨论第56-59页
   ·杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌及其筛选第56-57页
   ·对YBT-008杀虫晶体蛋白和基因的分析第57页
   ·Cyt2Ba、Cry11Aa、Cry4Aa和Cry4Ba的表达及杀线虫活性第57-59页
5 结论第59-66页
参考文献第66-74页
致谢第74页

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