| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-17页 |
| ·口蹄疫病毒基因组结构 | 第12-13页 |
| ·FMDV IRES 元件与 L 蛋白 | 第13-14页 |
| ·IRES 元件 | 第13页 |
| ·L 蛋白 | 第13-14页 |
| ·FMDV 2A 序列结构及功能 | 第14-16页 |
| ·密码子偏性 | 第16页 |
| ·本研究的目的和技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 对 FMDV IRES 元件 3’端两个功能性起始密码子周围序列的分析 | 第17-26页 |
| ·试验材料 | 第17-20页 |
| ·序列分析 | 第20页 |
| ·由两个起始密码子引导的整个编码序列的密码子偏性 | 第20页 |
| ·GC 含量和靶序列的密码子偏性的计算 | 第20页 |
| ·两个 AUG 周围对应环境的核苷酸偏好的计算 | 第20页 |
| ·分析结果 | 第20-24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 IRES 引导的不同翻译起始序列对下游蛋白表达影响的分析 | 第26-41页 |
| ·重组载体的构建和制备 | 第26-33页 |
| ·试验材料 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·CAT 基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·IRES 基因的扩增 | 第28页 |
| ·EGFP 基因的扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第29页 |
| ·CAT-IRES-EGFP 的融合 | 第29-31页 |
| ·双酶切 | 第31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·质粒提取、双酶切及测序鉴定 | 第31-32页 |
| ·无内毒素质粒的制备 | 第32-33页 |
| ·重组载体的表达和鉴定 | 第33-36页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·细胞转染 | 第33页 |
| ·重组载体表达鉴定 | 第33-34页 |
| ·荧光观察 | 第34-35页 |
| ·细胞处理 | 第35-36页 |
| ·WESTERN-BLOTTING 分析 | 第36-39页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·聚丙烯凝胶电泳及转印 | 第37页 |
| ·CAT 的检测 | 第37页 |
| ·EGFP 的检测 | 第37-38页 |
| ·结果分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 对 FMDV 2A 序列密码子的使用情况分析 | 第41-50页 |
| ·试验材料 | 第41-43页 |
| ·试验方法 | 第43-44页 |
| ·2A 序列核苷酸使用偏性的计算 | 第43页 |
| ·2A 序列连同 2B 序列的第一个密码子的真实密码子偏性的计算 | 第43-44页 |
| ·2A 序列密码子的使用偏性累积的计算 | 第44页 |
| ·试验结果 | 第44-48页 |
| ·2A 序列的核苷酸使用偏性 | 第44页 |
| ·2A 序列各位置的真实密码子偏性 | 第44页 |
| ·2A 序列的密码子偏性累积 | 第44-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 2A 序列 C-端甘氨酸同义密码子的改变对 2A 裂解效率影响的分析 | 第50-58页 |
| ·重组载体的构建和制备 | 第50-54页 |
| ·试验材料 | 第50页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·CAT-2A 的扩增 | 第51-52页 |
| ·EGFP 基因的扩增 | 第52页 |
| ·融合 PCR 反应 | 第52-53页 |
| ·双酶切、连接、转化 | 第53页 |
| ·质粒提取、双酶切及测序鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组载体的制备 | 第54页 |
| ·重组载体的表达、鉴定 | 第54-55页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·细胞转染 | 第54页 |
| ·重组载体表达鉴定 | 第54-55页 |
| ·荧光观察 | 第55页 |
| ·WESTERN-BLOTTING 分析 | 第55-56页 |
| ·试验材料 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55页 |
| ·pCAT-2A-EGFP 系列重组质粒表达的 Western –Blotting 分析结果 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 全文结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
