| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-20页 |
| ·海藻糖的主要性质 | 第14页 |
| ·海藻糖的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·海藻糖的保护机理 | 第15页 |
| ·海藻糖的应用及前景 | 第15-16页 |
| ·食品行业 | 第15-16页 |
| ·医药行业 | 第16页 |
| ·农业领域 | 第16页 |
| ·化妆品行业 | 第16页 |
| ·海藻糖的合成途径 | 第16-18页 |
| ·微生物抽提法 | 第17页 |
| ·微生物发酵法 | 第17页 |
| ·基因工程法 | 第17页 |
| ·酶合成法 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的意义及主要内容 | 第18-20页 |
| ·研究目的意义 | 第18-19页 |
| ·主要内容 | 第19-20页 |
| 第二章 浑浊红球菌海藻糖合成酶基因的克隆 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·浑浊红球菌 (ACCC 41021）基因组 DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第22页 |
| ·目的基因的回收 | 第22-23页 |
| ·目的片段与 pGEM-T 载体的连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·pGEM-T-treS 转化大肠杆菌 | 第23-24页 |
| ·重组单克隆的 PCR 验证 | 第24页 |
| ·SDS 碱裂解法小量制备质粒 DNA | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-29页 |
| ·浑浊红球菌海藻糖合成酶基因的克隆 | 第25页 |
| ·菌液 PCR 筛选阳性单克隆 | 第25-28页 |
| ·浑浊红球菌 ACCC41021 海藻糖合成酶的序列分析 | 第28-29页 |
| ·讨论与小结 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第三章 浑浊红球菌海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第31-48页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·菌株及载体 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·培养基及主要溶液 | 第31-32页 |
| ·实验仪器 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·pGEM-T-treS 的双酶切与目的片段回收 | 第32-33页 |
| ·表达载体 pRSET-B 的双酶切 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33页 |
| ·转化大肠杆菌 Top10 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体的 PCR 与双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·重组表达子的构建 | 第34页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第34页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第34-35页 |
| ·重组海藻糖合成酶酶活测定 | 第35-36页 |
| ·诱导温度的优化 | 第36页 |
| ·诱导前菌体 OD 值的优化 | 第36页 |
| ·取样时间的优化 | 第36-37页 |
| ·IPTG 浓度的优化 | 第37页 |
| ·重组海藻糖合酶的纯化 | 第37-38页 |
| ·重组酶转化产物的薄层色谱（TLC）分析 | 第38页 |
| ·重组海藻糖合成酶转化产物的高效液相色谱分析 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-45页 |
| ·重组表达载体 pRSET-B-treS 的构建 | 第39-40页 |
| ·重组子的诱导表达及表达产物分析 | 第40-41页 |
| ·重组海藻糖合酶的活性分析 | 第41-42页 |
| ·诱导温度对重组蛋白表达的影响 | 第42页 |
| ·诱导前菌体 OD 值对蛋白表达的影响 | 第42-43页 |
| ·取样时间的影响 | 第43-44页 |
| ·IPTG 浓度对蛋白表达的影响 | 第44页 |
| ·蛋白定量 | 第44-45页 |
| ·讨论与小结 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第四章 重组海藻糖合成酶的酶学性质分析 | 第48-56页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要溶液 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·重组海藻糖合酶的最适温度及热稳定性测定 | 第48-49页 |
| ·重组酶的最适 pH 及 pH 稳定性分析 | 第49页 |
| ·金属离子和化学试剂对酶活力的影响 | 第49-50页 |
| ·海藻糖合成酶催化产物生成率时间的变化 | 第50页 |
| ·重组海藻糖合酶的动力学常数分析 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-54页 |
| ·重组海藻糖合酶的最适温度及热稳定性测定 | 第50-51页 |
| ·重组海藻糖合酶的最适 pH 和对 pH 的稳定性分析 | 第51-52页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组海藻糖合酶酶活力的影响 | 第52页 |
| ·海藻糖合成酶催化产物生成率时间的变化 | 第52-53页 |
| ·重组海藻糖合酶的动力学常数 | 第53-54页 |
| ·讨论与小结 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第五章 全文结论 | 第56-58页 |
| ·主要研究结论 | 第56页 |
| ·下一步工作设想 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
