| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-31页 |
| ·肝细胞癌研究概述 | 第15-17页 |
| ·糖蛋白质组学和糖组学研究概况 | 第17-23页 |
| ·糖蛋白概述 | 第17-18页 |
| ·糖蛋白质组学研究方法 | 第18-23页 |
| ·基于凝集素方法的糖蛋白质组学研究进展 | 第23-26页 |
| ·基于凝集素的糖蛋白质组学研究概述 | 第23-25页 |
| ·基于凝集素的糖蛋白分离和鉴定技术研究进展 | 第25-26页 |
| ·基于质谱技术的糖链结构解析研究进展 | 第26-29页 |
| ·质谱技术在糖蛋白质组学中的应用概述 | 第26页 |
| ·糖链质谱离子化方法 | 第26-27页 |
| ·糖链质谱的数据分析 | 第27-29页 |
| ·本论文的研究目的及意义 | 第29-31页 |
| 第二章 凝集素-磁性微粒复合物的制备和表征 | 第31-41页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验部分 | 第31-33页 |
| ·试剂与材料 | 第31-32页 |
| ·实验仪器 | 第32页 |
| ·环氧化磁性微粒(EAMPs)的制备 | 第32页 |
| ·环氧化磁性微粒的表征 | 第32-33页 |
| ·CMPCs复合物的制备 | 第33页 |
| ·凝集素CMPCs凝集素含量测定 | 第33页 |
| ·实验结果 | 第33-38页 |
| ·环氧化磁性微粒表征 | 第33-35页 |
| ·凝集素固定化至环氧化磁性微粒的四种缓冲液优化 | 第35页 |
| ·凝集素固定化至环氧化磁性微粒的结合时间的确定 | 第35-36页 |
| ·环氧化磁性微粒固定化凝集素ConA的能力确定 | 第36-37页 |
| ·环氧化磁性微粒固定化凝集素ConA的表面覆盖率确定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第三章 凝集素-磁性微粒复合物分离和鉴定糖蛋白及其糖链结构方法的建立 | 第41-73页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·实验部分 | 第42-49页 |
| ·试剂与材料 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·LMPCs的制备 | 第43页 |
| ·LMPCs从模式蛋白中选择性分离糖蛋白 | 第43-44页 |
| ·LMPCs选择性分离糖蛋白 | 第44页 |
| ·糖蛋白的SDS-PAGE电泳及阿尔新蓝银染法分析 | 第44-45页 |
| ·糖蛋白的除盐和酶解 | 第45页 |
| ·糖肽的分离及糖肽酶PNG-ase F释放N-连接糖链 | 第45页 |
| ·C18柱N-糖链和多肽的分离 | 第45-46页 |
| ·MALDI-TOF分析标准糖蛋白和糖链 | 第46页 |
| ·LC-MS/MS鉴定复杂样品多肽 | 第46页 |
| ·LC-MS/MS质谱结果的数据分析 | 第46-47页 |
| ·MALDI-TOF/TOF-MS分析ConA分离血清样品中的糖链结构 | 第47页 |
| ·凝集素印迹(Lectin blotting)和蛋白质印迹(Western blotting)技术验证糖蛋白 | 第47-48页 |
| ·凝集素/糖抗体芯片技术(lectin/glyco-antibody microarrays)分析糖蛋白糖基化修饰水平 | 第48-49页 |
| ·实验结果 | 第49-69页 |
| ·CMPCs分离模式蛋白的特异性 | 第49页 |
| ·CMPCs特异性分离模式蛋白及其糖链的MALDI-TOF质谱鉴定 | 第49-51页 |
| ·不同凝集素磁性微粒复合物分离糖蛋白的差异 | 第51页 |
| ·糖原对LMPCs的抑制性研究 | 第51-52页 |
| ·LMPCs分离糖蛋白的稳定性研究 | 第52页 |
| ·凝集素CMPCs对HCC患者血清中的糖蛋白的分离和鉴定 | 第52-54页 |
| ·Lectin blotting和western blotting验证分离的糖蛋白 | 第54-55页 |
| ·Lectin/glyco-antibody microarrays分析目标糖蛋白糖基化的修饰水平 | 第55-62页 |
| ·CMPCs分离HCC患者血清中糖蛋白的Gene Ontology(GO)分类注释 | 第62-63页 |
| ·HCC患者血清中分离的糖蛋白的功能富集分析 | 第63页 |
| ·CMPCs分离的HCC患者血清中糖蛋白糖链分析 | 第63-64页 |
| ·二级碎片离子分析N-连接糖链组成,分支及糖苷键连接方式 | 第64-68页 |
| ·健康志愿者和HCC患者血清中糖链结构的相对比例的比较 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-73页 |
| 第四章 肝细胞癌患者血清糖蛋白的凝集素-磁性微粒复合物分离及其非标记的蛋白质质谱定量 | 第73-111页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·实验部分 | 第74-78页 |
| ·试剂与材料 | 第74-75页 |
| ·实验仪器 | 第75页 |
| ·LMPCs的制备 | 第75-76页 |
| ·CMPCs选择性分离高甘露糖型N-连接糖蛋白 | 第76页 |
| ·凝集素LCA,AAL-磁性微粒复合物选择性分离复杂型N-连接糖蛋白 | 第76页 |
| ·凝集素WGA-磁性微粒复合物选择性分离杂合型N-连接糖蛋白 | 第76页 |
| ·M-LMPCs选择性分离N-连接糖蛋白 | 第76页 |
| ·N-glyco-LMPCs法分离的糖蛋白定量和SDS-PAGE分析 | 第76页 |
| ·糖蛋白的除盐和酶解 | 第76-77页 |
| ·糖肽酶PNGases F去糖链和多肽除盐处理 | 第77页 |
| ·LC-MS/MS鉴定多肽 | 第77页 |
| ·质谱数据分析 | 第77页 |
| ·N-glyco-LMPCs法分离糖蛋白的非标记的蛋白质质谱定量 | 第77-78页 |
| ·实验结果 | 第78-108页 |
| ·四种S-LMPCs分离的糖蛋白 | 第78-79页 |
| ·四种S-LMPCs分离的糖蛋白的质谱鉴定 | 第79-80页 |
| ·M-LMPCs分离的糖蛋白的质谱鉴定 | 第80-81页 |
| ·N-glyco-LMPCs法分离糖蛋白的两种方法的比较分析 | 第81页 |
| ·N-glyco-LMPCs法分离糖蛋白的定量分析 | 第81-108页 |
| ·讨论 | 第108-109页 |
| ·小结 | 第109-111页 |
| 第五章 肝细胞癌患者血清滤膜辅助的凝集素分离糖肽及其糖基化位点分析 | 第111-135页 |
| ·引言 | 第111-112页 |
| ·实验部分 | 第112-115页 |
| ·试剂与材料 | 第112页 |
| ·实验仪器 | 第112页 |
| ·溶液配制 | 第112-113页 |
| ·血清蛋白的滤膜辅助胰蛋白酶(trypsin)酶解 | 第113-114页 |
| ·N-glyco-FASP法分离血清中N-连接糖肽及糖链释放 | 第114页 |
| ·糖肽的除盐处理 | 第114页 |
| ·糖肽的质谱鉴定和数据分析 | 第114页 |
| ·糖肽糖基化位点的确定 | 第114页 |
| ·鉴定蛋白的GO注释 | 第114-115页 |
| ·实验结果 | 第115-133页 |
| ·N-glyco-FASP分离血清中N-连接糖肽的质谱鉴定 | 第115页 |
| ·N-glyco-FASP法分离血清中N-连接糖肽糖基化位点的分析 | 第115-117页 |
| ·N-连接糖基化位点的序列子特异性 | 第117页 |
| ·N-glyco-FASP与N-glyco-LMPCs法分离N-连接糖蛋白/糖肽比较 | 第117-128页 |
| ·N-glyco-FASP与N-glyco-LMPCs法分离的N-连接糖蛋白物化性质比较 | 第128页 |
| ·N-glyco-FASP与N-glyco-LMPCs法分离N-连接糖蛋白效率比较 | 第128-130页 |
| ·健康志愿者和HCC患者血清中糖蛋白的功能及其差异分析 | 第130-132页 |
| ·HCC患者血清中特异表达的糖蛋白的功能聚类分析 | 第132-133页 |
| ·肝癌发生相关的糖蛋白的通路分析 | 第133页 |
| ·讨论 | 第133-134页 |
| ·小结 | 第134-135页 |
| 第六章 肝细胞癌血清中糖蛋白N-连接糖链的分离和MALDI质谱解析 | 第135-148页 |
| ·引言 | 第135-137页 |
| ·实验部分 | 第137-140页 |
| ·试剂与材料 | 第137-138页 |
| ·实验仪器 | 第138页 |
| ·溶液配制 | 第138页 |
| ·血清蛋白clean-up处理 | 第138页 |
| ·N-glycan-FASP-T法分离血清全糖蛋白N-连接糖链 | 第138-139页 |
| ·滤膜辅助血清蛋白的胰蛋白酶酶解 | 第139页 |
| ·滤膜辅助凝集素分离血清中糖蛋白N-连接糖链 | 第139页 |
| ·凝集素分离的糖肽的糖链释放 | 第139-140页 |
| ·糖链clean-up处理 | 第140页 |
| ·MALDI-TOF/TOF-MS解析糖链 | 第140页 |
| ·糖链质谱结构分析 | 第140页 |
| ·实验结果 | 第140-146页 |
| ·N-glycan-FASP-T法分离的血清总糖蛋白N-连接糖链指纹图谱 | 第140-141页 |
| ·N-glycan-FASP-L法分离的血清凝集素特异识别的糖蛋白N-连接糖链指纹图谱 | 第141-143页 |
| ·血清糖蛋白N-连接糖链结构的串联质谱解析 | 第143-145页 |
| ·N-glycan-FASP-T法分离的血清总糖蛋白N-连接糖链初步定量分析 | 第145-146页 |
| ·讨论 | 第146-147页 |
| ·小结 | 第147-148页 |
| 全文总结 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-167页 |
| 攻读博士期间的研究成果 | 第167-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 作者简介 | 第170页 |
