| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| ·铜绿假单胞菌的致病机理 | 第15-17页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第17-26页 |
| ·铜绿假单胞菌中的Ⅲ型分泌系统组成 | 第17-20页 |
| ·铜绿假单胞菌中的Ⅲ型分泌系统调控网络 | 第20-24页 |
| ·Ⅲ型分泌系统在铜绿假单胞菌急性感染过程中的作用 | 第24-26页 |
| ·针对Ⅲ型分泌系统的治疗策略 | 第26页 |
| ·双组分系统 | 第26-32页 |
| ·双组分系统的组成和类型 | 第27-28页 |
| ·铜绿假单胞菌中的双组分系统 | 第28-29页 |
| ·Gac/Rsm系统与Ⅲ型分泌系统的关系 | 第29-32页 |
| ·ATP结合盒系统 | 第32-34页 |
| ·研究目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第35-65页 |
| ·实验材料 | 第35-43页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第35-41页 |
| ·培养基及培养条件 | 第41-42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-65页 |
| ·碱裂解和SDS法制备质粒 | 第43-44页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·铜绿假单胞菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)体系 | 第45页 |
| ·酶切和连接 | 第45-46页 |
| ·电转化 | 第46页 |
| ·基因表达载体构建 | 第46-49页 |
| ·基因表达水平的检测 | 第49页 |
| ·转座突变体库的构建和筛选 | 第49-50页 |
| ·转座子插入位点的确定 | 第50-51页 |
| ·基因敲除(Gene knockout) | 第51-52页 |
| ·互补实验 | 第52-53页 |
| ·基因过表达实验 | 第53页 |
| ·定点突变(Site-directed mutagenesis) | 第53-56页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第56-57页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白 | 第57页 |
| ·RNA体外转录实验 | 第57-58页 |
| ·核酸与蛋白结合实验 | 第58页 |
| ·Ⅲ型分泌系统效应蛋白检测 | 第58-59页 |
| ·细菌运动能力检测 | 第59页 |
| ·生物被膜检测 | 第59-60页 |
| ·刚果红实验 | 第60页 |
| ·绿脓菌素检测 | 第60页 |
| ·细胞毒性检测 | 第60-61页 |
| ·ATP酶活性检测 | 第61-62页 |
| ·细菌双杂交实验(Bacterial two-hybrid assay) | 第62-63页 |
| ·胰蛋白酶限制性酶切蛋白实验 | 第63-65页 |
| 第三章 实验结果 | 第65-98页 |
| ·Ⅲ型分泌系统表达调控相关基因的筛选 | 第65-69页 |
| ·转座突变体库的构建 | 第65页 |
| ·转座突变体库的筛选 | 第65-66页 |
| ·突变体插入位点的确定 | 第66-69页 |
| ·PA4595基因功能的研究 | 第69-83页 |
| ·PA4595影响Ⅲ型分泌系统基因的转录 | 第69-71页 |
| ·PA4595影响Ⅲ型分泌系统效应蛋白的分泌 | 第71-72页 |
| ·PA4595影响生物被膜的形成、细菌的丛动能力以及绿脓菌素的产生 | 第72-73页 |
| ·PA4595与有机磷酸的转运无关 | 第73-75页 |
| ·PA4595定点突变分析 | 第75-77页 |
| ·PA4595蛋白的表达和纯化 | 第77-78页 |
| ·PA4595蛋白具有ATP酶活性 | 第78-79页 |
| ·ATP可诱导PA4595蛋白构象转变 | 第79-80页 |
| ·PA4595蛋白可与DNA或RNA直接结合 | 第80-83页 |
| ·PA1611基因功能的研究 | 第83-98页 |
| ·鉴定一株exoS表达降低的转座突变体 | 第83-84页 |
| ·过表达PA1611可抑制Ⅲ型分泌系统及细菌的运动能力并促进生物被膜的形成 | 第84-88页 |
| ·PA1611不通过HptB/PA3346/PA3347信号途径发挥作用 | 第88-90页 |
| ·PA1611通过Gac/Rsm调控途径发挥作用 | 第90-92页 |
| ·保守的磷酸化残基对PA1611的功能并不重要 | 第92-93页 |
| ·PA1611与RetS之间存在直接相互作用 | 第93-95页 |
| ·过表达PA1611可导致铜绿假单胞菌细胞毒性的丧失 | 第95-96页 |
| ·PA1775基因的突变可激活PA1611的表达 | 第96-98页 |
| 第四章 讨论 | 第98-104页 |
| ·铜绿假单胞菌中Ⅲ型分泌系统表达调控相关基因的筛选 | 第98页 |
| ·PA4595基因与Ⅲ型分泌系统及其他毒性因子表达的关系 | 第98-100页 |
| ·PA1611基因与Ⅲ型分泌系统及铜绿假单胞菌急慢性感染转换的关系 | 第100-103页 |
| ·小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 作者简介 | 第119页 |
