| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 综述一 猪流行性腹泻研究进展 | 第13-20页 |
| ·PEDV的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·PEDV的形态特征 | 第13页 |
| ·PEDV的抗原性 | 第13-14页 |
| ·PEDV的细胞培养特性 | 第14页 |
| ·PEDV的理化特性 | 第14页 |
| ·PEDV基因组结构与复制 | 第14-15页 |
| ·PEDV主要结构蛋白及其功能 | 第15-17页 |
| ·纤突(spike)S蛋白 | 第15-16页 |
| ·囊膜(membrane)M蛋白 | 第16-17页 |
| ·核衣壳(nucleocapsid)N蛋白 | 第17页 |
| ·包膜(envelope)E蛋白 | 第17页 |
| ·PEDV流行病学与致病机理 | 第17-18页 |
| ·PEDV常规疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| ·组织灭活苗 | 第18页 |
| ·细胞灭活苗 | 第18-19页 |
| ·细胞弱毒苗 | 第19页 |
| ·PEDV基因工程疫苗研究进展 | 第19-20页 |
| ·转基因植物表达S蛋白 | 第19-20页 |
| ·乳酸菌中表达N、S蛋白 | 第20页 |
| 综述二 减毒沙门氏菌在疫苗中的应用研究进展 | 第20-24页 |
| ·减毒沙门氏菌的减毒机理 | 第20-22页 |
| ·减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的优点 | 第22页 |
| ·减毒沙门氏菌入侵途径 | 第22页 |
| ·减毒沙门氏菌传递疫苗的免疫应答机制 | 第22-23页 |
| ·减毒沙门氏菌在疫苗研究中的应用 | 第23-24页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒Sa基因、Ma基因的克隆表达 | 第24-42页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·质粒、菌株、毒株和载体 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-35页 |
| ·PEDV Sa、Ma蛋白的原核表达及纯化 | 第26-34页 |
| ·PEDV Sa、Ma基因的PCR扩增及T-A克隆 | 第26-29页 |
| ·PEDV Sa、Ma基因T-A克隆质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒pET32α-PSa和pET32α-PMa的构建及鉴定 | 第29-31页 |
| ·PEDV Sa、Ma基因片段重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第31-33页 |
| ·PEDV Sa基因、Ma基因原核表达重组蛋白的大量表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白高免血清的制备及生物学活性检测 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白高免血清的制备 | 第34页 |
| ·重组蛋白的Western-blot检测 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| ·原核表达重组质粒的鉴定结果 | 第35页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白原核表达条件优化 | 第36-39页 |
| ·重组蛋白诱导表达时间的优化 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白诱导表达IPTG浓度的优化 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白纯化结果 | 第39页 |
| ·重组融合蛋白的Western-blot鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 重组减毒沙门氏菌的构建及生物学特性研究 | 第42-60页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第42页 |
| ·主要生物试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-53页 |
| ·pMD19-T-PM构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·pMD19-T-PM构建 | 第43-44页 |
| ·pMD19-T-PM的鉴定 | 第44页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-PM的构建及鉴定 | 第44-47页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-PM的构建 | 第44-45页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-PM的鉴定 | 第45-47页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-PS1-PM的构建及鉴定 | 第47-50页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-PS1-PM的构建 | 第47-48页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-PS1-PM的鉴定 | 第48-50页 |
| ·PEDV S基因与M基因真核表达质粒的体外表达 | 第50-51页 |
| ·提取转染用质粒 | 第50页 |
| ·转染COS-7细胞 | 第50-51页 |
| ·携带真核表达质粒的减毒沙门氏菌的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·制备减毒沙门氏菌SL7207感受态细胞 | 第51页 |
| ·电转化沙门氏菌SL7207 | 第51-52页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的鉴定 | 第52页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的生长曲线 | 第52页 |
| ·重组减毒沙门氏菌体外稳定性试验 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| ·重组真核表达质粒pVAXD-PM的鉴定结果 | 第53页 |
| ·重组真核表达质粒pVAXD-PS1-PM的鉴定及测序结果 | 第53-54页 |
| ·减毒沙门氏菌携带的真核表达质粒鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·重组真核表达质粒体外表达检测结果 | 第55-56页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的生长曲线 | 第56-57页 |
| ·重组减毒沙门氏菌携带质粒的稳定性 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 PEDV S/M基因疫苗口服免疫原性研究 | 第60-74页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| ·病毒、和实验动物 | 第60页 |
| ·主要生物试剂 | 第60页 |
| ·主要溶液的配制 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-64页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第61页 |
| ·RT-PCR检测SI基因、M基因的转录 | 第61页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的口服免疫原性试验 | 第61-64页 |
| ·免疫动物分组 | 第61-62页 |
| ·免疫方法 | 第62页 |
| ·抗体检测的样品采集 | 第62页 |
| ·免疫小鼠特异性PEDV血清IgG和肠道IgA抗体检测 | 第62-63页 |
| ·减毒沙门氏菌特异性血清IgG和肠道IgA检测 | 第63页 |
| ·免疫小鼠的脾细胞制备及γ-干扰素检测 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-72页 |
| ·重组减毒沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第64-65页 |
| ·RT-PCR检测S、M基因在体内的转录 | 第65页 |
| ·抗PEDV特异性血清IgG检测 | 第65-67页 |
| ·抗PEDV特异性肠道IgA检测 | 第67-68页 |
| ·抗减毒沙门氏菌特异性血清IgG检测 | 第68-69页 |
| ·抗减毒沙门氏菌特异性肠道IgA检测 | 第69-70页 |
| ·免疫小鼠γ干扰素检测 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 5 小结 | 第73-74页 |
| 全文结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-87页 |
| 作者简介 | 第87-88页 |
| 附件 | 第88-93页 |
