| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-28页 |
| ·抑制素及其功能研究 | 第13-14页 |
| ·抑制素结构 | 第13页 |
| ·抑制素功能 | 第13-14页 |
| ·卵泡抑素及其功能 | 第14页 |
| ·卵泡抑素的结构 | 第14页 |
| ·卵泡抑素的功能 | 第14页 |
| ·促卵泡素及其应用 | 第14-16页 |
| ·促卵泡素的结构 | 第14-15页 |
| ·促卵泡素的功能及其应用 | 第15-16页 |
| ·转座子的研究进展 | 第16-21页 |
| ·LINE-1(L1元件) | 第16-17页 |
| ·Tol2转座子 | 第17页 |
| ·SB转座子 | 第17-18页 |
| ·PB转座子 | 第18-21页 |
| ·RNA干扰及其应用 | 第21-24页 |
| ·RNAi的分子机理 | 第21页 |
| ·RNAi的特征 | 第21-22页 |
| ·RNAi技术的应用 | 第22-24页 |
| ·原核生物及真核生物启动子 | 第24-28页 |
| ·真核生物启动子分类 | 第25页 |
| ·哺乳动物组织特异性启动子 | 第25-26页 |
| ·卵巢组织特异性表达启动子 | 第26-28页 |
| 2 研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 3 材料与方法 | 第29-47页 |
| ·试验材料 | 第29-34页 |
| ·细胞与样品 | 第29页 |
| ·载体与菌株 | 第29-32页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第32-33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·分子生物学分析工具 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-47页 |
| ·双干扰载体的构建 | 第34-38页 |
| ·FSHβ表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·黄牛和水牛卵巢颗粒细胞的制备与培养 | 第41-42页 |
| ·水牛胎儿成纤维细胞的培养 | 第42页 |
| ·G418对颗粒细胞最低致死浓度的筛选 | 第42页 |
| ·脂质体法优化PB载体瞬时转染颗粒细胞的条件 | 第42-43页 |
| ·优化PB载体与转座酶共转染颗粒细胞的条件 | 第43-44页 |
| ·以最优条件对颗粒细胞进行转染 | 第44-45页 |
| ·转染后颗粒细胞总RNA提取及检测 | 第45页 |
| ·RT-PCR合成第一链cDNA | 第45页 |
| ·INHA、FST和FSHβ基因相对表达量分析 | 第45页 |
| ·转座子插入基因组的检测 | 第45-47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-60页 |
| ·双干扰载体的构建及鉴定 | 第47-49页 |
| ·克隆载体pEASY-U6的构建及鉴定 | 第47页 |
| ·中间载体pB-H1-U6的构建及鉴定 | 第47-48页 |
| ·干扰载体pB-H1-RNAil-U6-RNAi2的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| ·FSHp卵巢特异表达载体的构建及鉴定 | 第49-51页 |
| ·中间载体pBCYP19/pBOSP1的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| ·pBCYPl9-FSHβ/pBOSP1-FSHβ载体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| ·G418对BuGC最低致死浓度的筛选 | 第51页 |
| ·干扰载体转染技术的优化及其表达效果的分析 | 第51-55页 |
| ·瞬时转染BuGCs和BGCs的条件优化 | 第51-52页 |
| ·与PB酶共转染BuGCs的条件优化 | 第52-53页 |
| ·双干扰载体瞬时转染BuGCs和BGCs | 第53-54页 |
| ·双干扰载体与PB转座酶共转染BuGCs、BGCs和BuFFs | 第54-55页 |
| ·双干扰载体在BuGCs共转染中高效表达 | 第55页 |
| ·水牛FSHβ表达载体转染技术优化及其表达效果的分析 | 第55-56页 |
| ·表达载体瞬时转染BuGCs的条件优化 | 第55页 |
| ·表达载体瞬时转染BuGCs和BuFFs | 第55-56页 |
| ·双干扰载体的干扰效果、特异表达载体的表达特征的分析 | 第56-59页 |
| ·RNA提取的鉴定 | 第56页 |
| ·定量引物PCR检测 | 第56-57页 |
| ·BuGCs和BGCs中INHA相对表达量 | 第57页 |
| ·BuGCs和BGCs中FST相对表达量 | 第57-58页 |
| ·BuGCs中FSHβ相对表达量 | 第58-59页 |
| ·利用双干扰载体整合到基因组的阳性细胞的筛选和鉴定 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-64页 |
| ·细胞中RNAi干扰的探讨 | 第60-61页 |
| ·卵巢特异性启动子的探讨 | 第61-62页 |
| ·PB转座子在细胞中转染效果的探讨 | 第62-63页 |
| ·脂质体介导转染细胞的探讨 | 第63-64页 |
| 6 总结 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第64页 |
| ·特色创新 | 第64页 |
| ·进一步研究内容 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 硕士期间发表的文章或申请专利 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
