| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-17页 |
| ·干扰素的概况 | 第11-14页 |
| ·病毒与宿主细胞的对抗 | 第14-17页 |
| 2 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-32页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·细胞、菌株、毒株及相关蛋白 | 第19页 |
| ·构建载体所需要的材料、试剂和培养基 | 第19-20页 |
| ·蛋白表达及纯化所需材料和试剂 | 第20-21页 |
| ·SDS-page和western-b1ot所需试剂和材料 | 第21页 |
| ·ELISA所需的材料和试剂 | 第21-22页 |
| ·细胞培养所需的材料和试剂 | 第22页 |
| ·细胞转染所需的材料和试剂 | 第22页 |
| ·单抗纯化酶标所需的材料和试剂 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-32页 |
| ·引物的设计 | 第22-23页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第23页 |
| ·目的片段的扩增 | 第23-24页 |
| ·目的片段和载体的酶切及连接 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| ·原核蛋白的表达 | 第25页 |
| ·确定蛋白的表达形式 | 第25-26页 |
| ·包涵体的提取方法 | 第26页 |
| ·可溶性蛋白的纯化方法 | 第26页 |
| ·细胞转染(脂质体介导转染法,Lipofectine2000) | 第26-27页 |
| ·动物免疫 | 第27页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第27页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第27-28页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第28页 |
| ·细胞融合 | 第28页 |
| ·阳性细胞孔的筛选 | 第28-29页 |
| ·阳性细胞的克隆 | 第29页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第29-30页 |
| ·单克隆抗体的验证 | 第30页 |
| ·单抗的纯化 | 第30-31页 |
| ·单抗的酶标 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-46页 |
| ·猪IFN-β和IFN-γ基因的克隆与表达 | 第32-36页 |
| ·猪IFN-β和IFN-γ的扩增 | 第32-33页 |
| ·猪IFN-β和IFN-γ原核表达质粒和真核表达质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·猪IFN-β和IFN-γ的原核表达 | 第35-36页 |
| ·猪IFN-β和IFN-γ单克隆抗体的制备 | 第36-39页 |
| ·Balb/C小鼠的免疫与分泌特异性单克隆抗体细胞株的筛选 | 第36-37页 |
| ·western-blot验证单克隆抗体 | 第37-38页 |
| ·间接免疫荧光验证单克隆抗体 | 第38-39页 |
| ·猪IFN-B双抗体夹心ELISA方法的初步建立 | 第39-46页 |
| ·单抗腹水的制备与效价测定 | 第39页 |
| ·抗猪IFN-β单克隆抗体的纯化 | 第39-40页 |
| ·抗猪IFN-β单克隆抗体酶标后效价检测 | 第40页 |
| ·确定4株单抗是否针对不同的抗原表位 | 第40-42页 |
| ·方阵滴定确定包被抗体与酶标抗体的最佳工作浓度 | 第42页 |
| ·CHO细胞系表达的猪IFN-β作为抗原进行双抗体夹心 | 第42-43页 |
| ·标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| ·PRV刺激PAM取细胞上清进行双抗体夹心ELISA | 第44-46页 |
| 5 讨论与结论 | 第46-49页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·免疫原的制备 | 第46页 |
| ·小鼠免疫效价低的问题 | 第46-47页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第47页 |
| ·原核蛋白与真核蛋白问题 | 第47页 |
| ·酶标抗体的酶标效果 | 第47页 |
| ·双抗体夹心ELISA法标准曲线的建立 | 第47-48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
