| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-28页 |
| ·结核病的流行及其危害 | 第15页 |
| ·猕猴结核病的流行现状及其危害 | 第15-16页 |
| ·猕猴结核病的主要诊断方法 | 第16-27页 |
| ·X-光胸透 | 第16-17页 |
| ·细菌学检测方法 | 第17页 |
| ·提纯结核菌素(PPD)皮肤试验 | 第17-18页 |
| ·血清学诊断方法 | 第18-23页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第23-24页 |
| ·IFN-γ释放法 | 第24-27页 |
| ·展望 | 第27-28页 |
| 第2章 MmIFN-γ基因的克隆、原核表达和酵母表达 | 第28-51页 |
| ·研究的目的意义 | 第28页 |
| ·材料 | 第28-32页 |
| ·菌株以及质粒 | 第28-30页 |
| ·主要药品以及相关试剂 | 第30页 |
| ·大肠杆菌培养基的配制 | 第30页 |
| ·毕赤酵母培养基的配制 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液的配制 | 第31页 |
| ·Western blot缓冲液的配制 | 第31页 |
| ·HIS标签融合重组蛋白纯化缓冲液的配制 | 第31-32页 |
| ·其他试剂的配制 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-41页 |
| ·MmIFN-γ基因原核表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·MmIFN-γ基因的引物设计及PCR | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33页 |
| ·重组质粒pET-30a-MmIFN-γ的构建 | 第33-34页 |
| ·连接产物转化入大肠杆菌 | 第34页 |
| ·重组质粒的小量制备 | 第34页 |
| ·重组质粒pET-30a-MmIFN-γ的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·MmIFN-γ基因的原核表达以及鉴定 | 第34-37页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白MmIFN-γ的纯化 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白MmIFN-γ的Western blot鉴定 | 第36-37页 |
| ·MmIFN-γ基因酵母表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·MmIFN-γ基因的引物设计及PCR | 第37-38页 |
| ·重组质粒pPICZαA-MmIFN-γ的构建 | 第38页 |
| ·连接产物转化入大肠杆菌 | 第38-39页 |
| ·质粒的提取 | 第39页 |
| ·重组质粒pPICZαA-MmIFN-γ的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·MmIFN-γ基因的酵母表达以及鉴定 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第39-40页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·质粒的电转化 | 第40-41页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定(PCR) | 第41页 |
| ·甲醇诱导重组酵母表达蛋白 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·MmIFN-γ基因的克隆以及鉴定 | 第41-43页 |
| ·重组MmIFN-γ的原核表达 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE检测原核表达的MmIFN-γ | 第43-44页 |
| ·Western blot分析原核表达的MmIFN-γ | 第44页 |
| ·重组MmIFN-γ的酵母表达 | 第44-47页 |
| ·重组酵母菌的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组酵母菌MmIFN-γ的表达分析 | 第45-46页 |
| ·Western blot分析真核表达的MmIFN-γ | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-51页 |
| ·重组MmIFN-γ表达系统的选择 | 第47-50页 |
| ·重组MmIFN-γ蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 第3章 MmIFN-γ单克隆抗体与多克隆抗体的制备 | 第51-71页 |
| ·研究的目的意义 | 第51页 |
| ·材料 | 第51-53页 |
| ·细胞株与实验动物 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·溶液和培养基的配制 | 第52-53页 |
| ·制备单克隆抗体相关溶液和培养基的配制 | 第52页 |
| ·ELISA主要溶液的配制 | 第52页 |
| ·抗体纯化相关溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-60页 |
| ·抗MmIFN-γ单克隆抗体的制备 | 第53-57页 |
| ·小鼠免疫 | 第53页 |
| ·MmIFN-γ抗体的间接ELISA检测方法的建立 | 第53-54页 |
| ·细胞融合 | 第54-55页 |
| ·杂交瘤细胞阳性孔的筛选 | 第55-56页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第56页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第56页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第56-57页 |
| ·杂交痈细胞的冻存以及复苏 | 第57页 |
| ·抗MmIFN-γ单克隆抗体的鉴定 | 第57-58页 |
| ·腹水效价的测定 | 第57页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的计数 | 第57页 |
| ·单克隆抗体抗原识别表位的鉴定 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第58页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力的检测 | 第58页 |
| ·单克隆抗体和酵母表达MmIFN-γ反应性的测定 | 第58页 |
| ·MmIFN-γ多克隆抗体的制备 | 第58-60页 |
| ·MmIFN-γ免疫日本大耳白兔 | 第58-59页 |
| ·大耳白兔血清效价的测定 | 第59页 |
| ·多克隆抗体的纯化及效价的测定 | 第59页 |
| ·多抗捕获MmIFN-γ检测各株单克隆抗体的反应性 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-67页 |
| ·免疫小鼠融合前和兔采血前的血清效价 | 第60-61页 |
| ·细胞融合 | 第61-62页 |
| ·杂交痈细胞的筛选及克隆 | 第62页 |
| ·腹水效价的测定结果 | 第62页 |
| ·杂交痛细胞染色体的计数结果 | 第62-64页 |
| ·单克隆抗体抗原识别表位的鉴定 | 第64页 |
| ·单克隆抗体的亚型以及相对亲和力的测定 | 第64-65页 |
| ·单克隆抗体和酵母表达MmIFN-γ反应性的测定 | 第65页 |
| ·抗体的纯化和多抗效价的测定 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-71页 |
| ·免疫原 | 第67页 |
| ·实验动物的选择和免疫方法 | 第67-68页 |
| ·细胞融合 | 第68-69页 |
| ·筛选杂交瘤细胞的方法选择 | 第69页 |
| ·杂交痈细胞的克隆化 | 第69-71页 |
| 第4章 MmIFN-γ间接双夹心ELISA方法的建立 | 第71-78页 |
| ·研究的目的意义 | 第71页 |
| ·材料 | 第71页 |
| ·主要试剂和材料 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·单抗和多抗最佳工作浓度的确定 | 第71-72页 |
| ·单克隆抗体检测MmIFN-γ敏感度的测定 | 第72页 |
| ·MmIFN-γ间接双夹心ELISA方法的建立及临床样本的检测 | 第72-73页 |
| ·各株单克隆抗体对天然MmIFN-γ的检测 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-76页 |
| ·单抗和多抗最佳工作浓度的确定 | 第73-74页 |
| ·不同单克隆抗体检测MmIFN-γ敏感度确定 | 第74页 |
| ·各株单克隆抗体对天然MmIFN-γ的检测 | 第74-75页 |
| ·MmIFN-γ间接双夹心ELISA方法的建立及临床样本的检测 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·单克隆抗体的选择 | 第76页 |
| ·称猴结核病IFN-Y检测方法的应用和展望 | 第76-77页 |
| ·基于细胞免疫进行结核病诊断的展望 | 第77-78页 |
| 第5章 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
