| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·课题的提出 | 第11-13页 |
| ·前人研究进展 | 第13-18页 |
| ·单宁研究进展 | 第13-16页 |
| ·植物单宁研究进展概述 | 第13页 |
| ·柿单宁组分与结构 | 第13-14页 |
| ·不同类型柿单宁细胞发育模式研究 | 第14页 |
| ·柿单宁生物合成相关基因研究进展 | 第14-16页 |
| ·花青苷研究进展概述 | 第16-17页 |
| ·MATE基因研究进展 | 第17-18页 |
| ·MATE家族基因的基本特征及生理功能 | 第17页 |
| ·原花青素与花青苷跨膜相关MATE基因研究进展 | 第17-18页 |
| ·本课题研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第19-20页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·细菌培养基 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-34页 |
| ·柿果实单宁含量及单宁细胞大小测定 | 第20-21页 |
| ·相关试剂及其配制方法 | 第20页 |
| ·可溶性单宁及不溶性单宁含量测定 | 第20-21页 |
| ·印迹法测定单宁含量 | 第21页 |
| ·单宁细胞大小测定 | 第21页 |
| ·基因克隆准备工作 | 第21-24页 |
| ·总RNA提取 | 第21-22页 |
| ·cDNA合成 | 第22页 |
| ·基因组DNA限制性内切酶酶切 | 第22-23页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第23-24页 |
| ·酶切产物和接头连接 | 第24页 |
| ·DkMATE1基因克隆 | 第24-28页 |
| ·DkMATE1基因部分cDNA序列扩增 | 第24-25页 |
| ·DkMATE1基因3’端序列扩增 | 第25-27页 |
| ·DkMATE1基因5’端序列扩增 | 第27页 |
| ·DkMATE1基因DNA及cDNA全长扩增 | 第27-28页 |
| ·DkMATE2基因克隆 | 第28-31页 |
| ·DkMATE2基因3’端序列扩增 | 第28-29页 |
| ·DkMATE2基因5’端序列扩增 | 第29-31页 |
| ·目的片段AT克隆测序 | 第31-33页 |
| ·目的片段琼脂糖凝胶电泳检测 | 第31页 |
| ·目的片段回收纯化 | 第31-32页 |
| ·目的片段连接 | 第32页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆的增值及测序片段的选择 | 第32页 |
| ·测序和序列分析 | 第32-33页 |
| ·实时定量PCR | 第33-34页 |
| ·RNA提取 | 第33页 |
| ·RNA反转录成cDNA | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-51页 |
| ·柿果实发育过程中单宁含量及单宁细胞大小变化 | 第34-39页 |
| ·果实发育及脱涩情况初探 | 第34-35页 |
| ·果实发育过程中单宁细胞大小变化 | 第35-36页 |
| ·果实发育过程中单宁含量变化 | 第36-39页 |
| ·总RNA提取和质量检测 | 第39页 |
| ·DkMATE1全长克隆及生物信息学分析 | 第39-44页 |
| ·DkMATE1基因cDNA和DNA全长克隆 | 第39-40页 |
| ·DkMATE1的基因结构和序列分析 | 第40页 |
| ·DkMATE1编码蛋白的基本参数 | 第40-43页 |
| ·DkMATE1编码蛋白的氨基酸序列比较与分子进化分析 | 第43-44页 |
| ·DkMATE1的RT-PCR表达情况分析 | 第44-46页 |
| ·DkMATE1在果实发育过程中的表达模式 | 第44-45页 |
| ·DkMATE1在不同组织部位中的表达模式 | 第45-46页 |
| ·DkMATE2全长克隆及生物信息学分析 | 第46-49页 |
| ·DkMATE2基因cDNA和DNA全长克隆 | 第46-47页 |
| ·DkMATE2的序列分析 | 第47-49页 |
| ·DkMATE2的RT-PCR表达情况分析 | 第49-51页 |
| ·DkMATE2在果实发育过程中的表达模式 | 第49-50页 |
| ·DkMATE2在不同组织部位中的表达模式 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·完全甜柿单宁发育模式分析 | 第51页 |
| ·DkMATE1基因功能分析 | 第51-54页 |
| ·DkMATE1蛋白序列及结构特征分析 | 第51-52页 |
| ·DkMATE1在柿单宁生物合成途径中的功能分析 | 第52-54页 |
| ·该基因为柿单宁生物合成途径中的晚期合成基因 | 第52页 |
| ·推测DkMATEl在柿中转运单宁的前体物质表儿茶素-3’-O-葡萄糖苷 | 第52-53页 |
| ·DkMATE1的表达与完全甜柿单宁积累趋势成正相关,与非完全甜柿不相关 | 第53-54页 |
| ·DkMATE2基因功能分析 | 第54页 |
| ·DkMATE2蛋白序列及结构特征分析 | 第54页 |
| ·DkMATE2在柿花青苷生物合成途径中的功能分析 | 第54页 |
| 5 本研究创新之处 | 第54-55页 |
| 6 进一步工作设想 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-72页 |
| 附表1:引物序列 | 第64-65页 |
| 附图1不同发育时期果实图片 | 第65-66页 |
| 附图2 DkMATEl DNA全长序列 | 第66-68页 |
| 附图3 DkMATEl cDNA全长序列 | 第68-69页 |
| 附图4 ZUM47E/编码的氨基酸序列 | 第69-70页 |
| 附图5 DkMATE2 cDNA序列 | 第70-71页 |
| 附图6 ZUM47E2编码的氨基酸序列 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
