| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-15页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章:综述 | 第16-39页 |
| 一、酚氧化酶在昆虫免疫中的功能 | 第16-28页 |
| 二、活性氧自由基与先天免疫 | 第28-29页 |
| 三、抗氧化系统介绍 | 第29-34页 |
| ·硫氧还蛋白过氧化物酶(PRXs) | 第31页 |
| ·硫氧还蛋白 | 第31-32页 |
| ·硫氧还蛋白还原酶 | 第32页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶(GPx) | 第32-33页 |
| ·谷胱甘肽转移酶 | 第33页 |
| ·超氧化物歧化酶和过氧化氢酶 | 第33-34页 |
| ·脂肪酸结合蛋白(FABP)抗氧化作用 | 第34页 |
| 四、对虾免疫相关研究进展 | 第34-39页 |
| 第二章:中国明对虾丝氨酸蛋白酶基因的研究 | 第39-63页 |
| 1 材料和方法 | 第41-45页 |
| ·中国明对虾的免疫刺激 | 第41页 |
| ·总RNA的提取和SMART cDNA合成 | 第41-42页 |
| ·中国明对虾FcSPH,FcCUBSP,FcMAS和FcCSP的基因克隆 | 第42页 |
| ·序列分析 | 第42-43页 |
| ·FcSP,FcSPH,FcMas,FcCUBSP和FcCSP的组织分布和受到弧菌或病毒刺激不同时间的变化 | 第43页 |
| ·FcSPH和FcCSP的重组表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·FcSP.FcSPH和FcCSP多克隆抗体的制备和Westen Blot的分析 | 第44-45页 |
| 2. 结果 | 第45-57页 |
| ·中国明对虾丝氨酸蛋白酶(FcSP)及其同系物(FcSPH),FcMas和FcCUBSP的基因克隆 | 第45页 |
| ·中国明对虾胶原丝氨酸蛋白酶collagenolytic serine proteases(FcCSP)的基因克隆 | 第45-50页 |
| ·中国明对虾FcSP,FcSPH,FcMas.FcCUBSP和FcCSP的相似性分析 | 第50-52页 |
| ·FcSP,FcSPH,FcMAS,FcCUBSP,FcCSP的组织分布和受病原刺激表达模式变化分析 | 第52-55页 |
| ·FcSP,FcSPH,FcMAS和FcCSP的免疫印迹分析 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-63页 |
| ·中国明对虾多结构域的SP | 第57-60页 |
| ·中国明对虾含单结构域的FcCSP | 第60-63页 |
| 第三章:中国明对虾抗氧化系统的研究 | 第63-94页 |
| 第一部分:中国明对虾谷胱甘肽抗氧化系统的研究 | 第63-77页 |
| 1 材料和方法 | 第64-65页 |
| ·总RNA的提取和SMART cDNA合成(见第二章1.2) | 第64页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶(FcGPx)及转移酶基因(FcMuGST,FcThetaGS7)克隆 | 第64-65页 |
| ·序列分析(见第二章1.4) | 第65页 |
| ·提取正常及细菌刺激不同时间段对虾各组织的总RNA(见第二章1.2) | 第65页 |
| ·RT-PCR | 第65页 |
| ·正常刺激虾和弧菌刺激虾特定组织总谷胱甘肽过氧化物酶和转移酶活性 | 第65页 |
| 2 实验结果 | 第65-75页 |
| ·中国明对虾FcGPx.FcGST基因克隆 | 第65-67页 |
| ·FcGPx,FcThetaGST,FcMuGST多重序列比多和进化树分析 | 第67-72页 |
| ·中国明对虾正常组织和弧菌刺激组织FcGPx的组织分布和活性变化 | 第72-73页 |
| ·中国明对虾FcGST在正常对虾和弧菌刺激对虾中的组织分布和活性检测 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 第二部分 中国明对虾硫氧还蛋白在抗WSSV中的作用 | 第77-86页 |
| 1 材料和方法 | 第78-79页 |
| ·SMART cDNA合成(见第二章1.2) | 第78页 |
| ·中国明对虾硫氧还蛋白(FcTRX)基因3’,5’端克隆 | 第78页 |
| ·序列分析 | 第78页 |
| ·提取正常及WSSV刺激不同时间鳃和肝胰腺组织的总RNA(见第二章1.2) | 第78页 |
| ·荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分析FcTRX的组织分布和在鳃或者肝胰腺中受WSSV刺激不同时间表达模式的变化 | 第78页 |
| ·FcTRX重组表达、蛋白纯化及抗体制备和Western blot检测FcTRX蛋白在鳃和肝胰腺中受到WSSV刺激的变化 | 第78-79页 |
| 2 实验结果及分析 | 第79-84页 |
| ·FcTRX的基因克隆和序列分析 | 第79-80页 |
| ·相似性,序列比对和进化树分析 | 第80-81页 |
| ·FcTRX mRNA的组织分布 | 第81-82页 |
| ·FcTRX在受到WSSV刺激不同时间的表达模式 | 第82-83页 |
| ·重组表达,纯化和免疫印迹分析 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 第三部分 脂肪酸结合蛋白在中国明对虾抗感染中的功能 | 第86-94页 |
| 1 材料和方法 | 第87-88页 |
| ·SMART cDNA合成(见第二章1.2) | 第87页 |
| ·中国对虾脂肪酸结合蛋白(FcFABP)的基因克隆 | 第87页 |
| ·序列分析(见第二章) | 第87页 |
| ·提取正常及弧菌或者WSSV刺激不同时间的对虾肝胰腺的总RNA(见第二章1.2) | 第87页 |
| ·RT-PCR检测FcFABP的组织分布及受弧菌刺激24 h的变化,qRT-PCR分析FcFABP在肝胰腺中受弧菌或WSSV刺激不同时间的变化 | 第87页 |
| ·FcFABP重组表达、蛋白纯化及抗体制备和Western blot分析其组织分布 | 第87-88页 |
| ·细菌结合实验 | 第88页 |
| 2 实验结果及分析 | 第88-93页 |
| ·中国明对虾FcFABP的基因克隆 | 第88-89页 |
| ·FcFABP的进化树分析 | 第89-91页 |
| ·FcFABP的组织分布,qRT-PCR检测FcFABP受到病原刺激的变化 | 第91页 |
| ·免疫印迹和结合实验 | 第91-93页 |
| 3 讨论 | 第93-94页 |
| 第四章:中国明对虾半胱氨酸蛋白酶的研究 | 第94-107页 |
| 1 材料和方法 | 第95-96页 |
| ·SMART cDNA合成(见第二章1.2) | 第95页 |
| ·中国明对虾组织蛋白酶L(FcCathL)和FcLegu的基因克隆 | 第95-96页 |
| ·序列分析(见第二章1.4) | 第96页 |
| ·提取正常及细菌或WSSV刺激不同时间段对虾各组织的总RNA(见第二章1.2) | 第96页 |
| ·RT-PCR分析FcCathL和FcLegu的组织分布及受到弧菌刺激24 h的变化,qRT-PCR分析FcCathL和FcLegu在肝胰腺中受弧菌或者WSSV刺激的变化 | 第96页 |
| ·FcCathL和FcLegu重组表达、蛋白纯化、抗体制备和Western blot分析其组织分布极其受到弧菌或WSSV刺激的变化 | 第96页 |
| 2 实验结果及分析 | 第96-104页 |
| ·中国明对虾组织蛋白酶L(FcCathL)和天冬酰胺内肽酶(FcLegu)的基因克隆 | 第96-99页 |
| ·中国明对虾组织蛋白酶L(FcCathL)和天冬酰胺内肽酶(FcLegu)进化树分析 | 第99-100页 |
| ·中国明对虾组织蛋白酶L(FcCathL)和天冬酰胺内肽酶(FcLegu)mRNA的组织分布和表达模式分析 | 第100-102页 |
| ·重组表达和纯化 | 第102-103页 |
| ·免疫印迹研究FcCathL和FcLegu在蛋白水平上受弧菌和病毒的表达变化 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-107页 |
| 论文总结 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第127-128页 |
| 发表论文 | 第128-146页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第146页 |
