| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-36页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第12页 |
| ·PRRS的危害及流行病学特点 | 第12-13页 |
| ·PRRSV病原特性 | 第13-16页 |
| ·PRRSV的分类 | 第13页 |
| ·PRRSV的理化学特性 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第14页 |
| ·PRRSV的致病机理及生物学特性 | 第14-16页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第16-23页 |
| ·PRRSV基因组的结构与功能 | 第16-18页 |
| ·PRRSV的蛋白质 | 第18-21页 |
| ·PRRSV的基因组变异和RNA重组 | 第21-22页 |
| ·PRRSV的抗原性变异 | 第22-23页 |
| ·PRRSV的毒力变异 | 第23页 |
| ·PRRSV的免疫学反应 | 第23-27页 |
| ·抗PRRSV的体液免疫反应 | 第23-25页 |
| ·抗PRRSV的细胞免疫反应 | 第25-26页 |
| ·PRRSV与免疫抑制 | 第26-27页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第27-31页 |
| ·PRRS传统常规疫苗 | 第27-29页 |
| ·PRRS新型疫苗研究进展 | 第29-31页 |
| ·杆状病毒简介 | 第31-36页 |
| ·杆状病毒表达系统的研究 | 第31-33页 |
| ·杆状病毒表达系统安全性高 | 第32页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统目的基因容量大 | 第32页 |
| ·杆状病毒表达系统蛋白表达效率高 | 第32-33页 |
| ·杆状病毒表达系统具有翻译后修饰系统 | 第33页 |
| ·杆状病毒表达系统操作简单 | 第33页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体的研究 | 第33-34页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体在疫苗研究中的应用 | 第34-36页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第36-37页 |
| 第3章 材料与方法 | 第37-53页 |
| ·试验材料 | 第37-41页 |
| ·毒株、细胞与菌株 | 第37页 |
| ·载体与质粒 | 第37-38页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第38-39页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第39-40页 |
| ·免疫反应试验所用抗原及血清 | 第40页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第40-41页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-53页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第41-42页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第42页 |
| ·线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第42页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第42-43页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第44-46页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第46页 |
| ·构建重组杆状病毒的操作流程及示意图 | 第46-48页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第48页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第48页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第48页 |
| ·重组杆状病毒转导Maco-145细胞 | 第48页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第48-49页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第49页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第49-52页 |
| ·动物试验 | 第52页 |
| ·统计学方法 | 第52-53页 |
| 第4章 结果与分析 | 第53-62页 |
| ·穿梭质粒Bacmid-G-5m/6的构建 | 第53-57页 |
| ·pFastBac-G质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·pFastBac-G-5m/6转移质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·重组Bacmid-G-5m/6的构建 | 第55-57页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-5m/6获得 | 第57页 |
| ·间接免疫荧光检测PRRSV ORF6和修饰的ORF5基因的表达 | 第57-58页 |
| ·重组杆状病毒毒价测定 | 第58页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-5m/6在小鼠体内的免疫效力检验 | 第58-62页 |
| ·特异性抗猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体检测 | 第59-60页 |
| ·ELISA方法分析免疫小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ水平 | 第60-61页 |
| ·荧光定量PCR方法分析免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的mRNA水平 | 第61-62页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第62-65页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒的构建 | 第62页 |
| ·杆状病毒转导哺乳动物细胞可能机制 | 第62-63页 |
| ·重组杆状病毒诱导的免疫应答 | 第63页 |
| ·杆状病毒的佐剂效应 | 第63-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73页 |
