| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 参考文献 | 第14-16页 |
| 实验流程图 | 第16-17页 |
| 第一部分 mST大肠杆菌原核表达及体外细胞毒性测试 | 第17-37页 |
| 1.mST大肠杆菌原核表达质粒构建 | 第17-30页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·细菌和载体 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-24页 |
| ·mST原核表达基因的构建 | 第19-21页 |
| ·mST在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·mST诱导可溶蛋白的分离纯化: | 第22页 |
| ·mST包涵体纯化及复性 | 第22-24页 |
| ·结果 | 第24-29页 |
| ·mST原核表达的分子构建 | 第24-25页 |
| ·mST在大肠杆菌的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·mST蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·包涵体纯化及复性 | 第27-28页 |
| ·mS的分子构建及蛋白表达、纯化和包涵体复性 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 2.mST体外细胞杀伤功能初步测试 | 第30-37页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·细胞选择与培养 | 第30页 |
| ·蛋白的预处理 | 第30-31页 |
| ·mST体外细胞毒性实验 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-36页 |
| ·mST对EL4的杀伤效果 | 第32-34页 |
| ·细胞杀伤的形态学观察 | 第34-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第二部分 mST真核毕赤酵母表达及细胞毒性测试 | 第37-62页 |
| 3.mST毕赤酵母表达株构建 | 第37-50页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·细菌与载体 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·表达质粒pPIC9K-mST的构建 | 第39-40页 |
| ·表达质粒的线性化及质粒浓缩 | 第40-41页 |
| ·酵母电转化感受态制备 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母细胞的电穿孔转化 | 第42-43页 |
| ·多拷贝插入重组子的筛选 | 第43-44页 |
| ·鉴定Mut+和Muts | 第44页 |
| ·菌株保存 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·表达质粒pPIC9K-mST的构建 | 第44-45页 |
| ·表达质粒与空载体的线性化 | 第45-46页 |
| ·毕赤酵母GS115的电穿孔转化 | 第46-47页 |
| ·GS115多拷贝插入重组子的筛选 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 4.mST在毕赤酵母中的分泌表达与纯化 | 第50-58页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·主要材料和试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器和设备 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·PIC9K-mST的诱导 | 第51页 |
| ·最佳诱导时间与最佳甲醇浓度的确立 | 第51-52页 |
| ·PIC9K-mST纯化 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-57页 |
| ·mST蛋白的初次诱导 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白表达的优化 | 第54-56页 |
| ·PIC9K-mST纯化 | 第56页 |
| ·PIC9K-mS的制备 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 5.PIC9K-mST体外杀伤功能初步测试 | 第58-62页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·细胞培养 | 第58页 |
| ·蛋白的预处理 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-61页 |
| ·PIC9K-mST对EL4的杀伤作用 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 讨论 | 第62-68页 |
| 全文总结 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 综述 | 第74-85页 |
| 重组免疫毒素构建的研究进展 | 第74-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 个人简介 | 第86页 |