| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 胁迫对杜氏盐藻超氧化物歧化酶活性的影响 | 第11-18页 |
| 1 材料 | 第11-12页 |
| ·藻种 | 第11页 |
| ·仪器设备 | 第11页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第11-12页 |
| ·盐生杜氏藻培养基 | 第12页 |
| 2 方法 | 第12-14页 |
| ·盐生杜氏藻的培养 | 第12页 |
| ·胁迫条件下培养盐生杜氏藻 | 第12-13页 |
| ·盐藻粗酶液的提取 | 第13页 |
| ·SOD活性测定 | 第13-14页 |
| 3 结果与分析 | 第14-16页 |
| ·盐胁迫对杜氏盐藻MnSOD酶活性的影响 | 第14-15页 |
| ·碱胁迫对杜氏盐藻MnSOD酶活性的影响 | 第15页 |
| ·紫外胁迫对杜氏盐藻MnSOD酶活性的影响 | 第15-16页 |
| 4 讨论 | 第16-18页 |
| ·SOD与杜氏盐藻耐盐碱机制的关系 | 第16-17页 |
| ·酶活试剂盒的使用 | 第17页 |
| ·耐碱研究中缓冲液的选择 | 第17-18页 |
| 第二章 盐生杜氏藻MnSOD基因cDNA的EST序列获得和全长克隆 | 第18-32页 |
| 1 材料 | 第18-19页 |
| ·藻种 | 第18页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·载体 | 第18页 |
| ·酶制剂 | 第18页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第18-19页 |
| ·仪器 | 第19页 |
| ·引物的合成 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-26页 |
| ·盐生杜氏藻的培养 | 第19页 |
| ·盐生杜氏藻总RNA的提取及质量的检测 | 第19-20页 |
| ·反转录PCR | 第20页 |
| ·盐生杜氏藻MnSOD基因EST序列的同源克隆 | 第20-22页 |
| ·盐生杜氏藻MnSOD基因的3’RACE扩增 | 第22-23页 |
| ·盐生杜氏藻MnSOD基因的5’RACE扩增 | 第23-25页 |
| ·全长cDNA序列的拼接 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-28页 |
| ·盐藻总RNA的质量检测 | 第26页 |
| ·杜氏盐藻MnSOD基因的EST的克隆结果 | 第26页 |
| ·杜氏盐藻MnSOD基因的3’RACE结果 | 第26-27页 |
| ·杜氏盐藻MnSOD基因的5’RACE结果 | 第27页 |
| ·测序结果的拼接 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-32页 |
| ·获得高质量的总RNA | 第28-29页 |
| ·基因同源克隆中简并PCR技术的应用 | 第29-30页 |
| ·cDNA 3’末端快速扩增(3’RACE)的使用 | 第30-31页 |
| ·cDNA 5’末端快速扩增(5’RACE)的使用 | 第31-32页 |
| 第三章 盐生杜氏藻DsMnSOD基因的生物信息学分析 | 第32-43页 |
| 1 分析方法 | 第32-34页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第32页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第32-34页 |
| 2 分析结果 | 第34-42页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第34-35页 |
| ·蛋白序列分析 | 第35-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| ·转运肽预测结果的讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 盐生杜氏藻DsMnSOD基因的原核表达研究 | 第43-59页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·质粒和菌株 | 第43页 |
| ·酶、主要试剂及试剂盒 | 第43-44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·引物合成和测序 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-50页 |
| ·盐生杜氏藻DsMnSOD基因ORF扩增引物的设计 | 第44页 |
| ·ORF序列的扩增 | 第44-45页 |
| ·TA克隆和测序 | 第45页 |
| ·表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·pET30a-ORF在大肠杆菌中的表达筛选和优化 | 第46-47页 |
| ·通过金属螯合亲和层析纯化杜氏盐藻MnSOD蛋白 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第47-48页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第48页 |
| ·酶活测定 | 第48页 |
| ·酶种类鉴定 | 第48-49页 |
| ·酶性质鉴定 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-56页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·诱导条件的优化 | 第51-52页 |
| ·原核表达杜氏盐藻MnSOD融合蛋白的分离纯化 | 第52-53页 |
| ·杜氏盐藻MnSOD的种类鉴定 | 第53-54页 |
| ·酶性质鉴定 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·ORF阅读框的选取 | 第56页 |
| ·杜氏盐藻MnSOD蛋白表达的优化 | 第56-57页 |
| ·表达载体和酶切位点的选择 | 第57页 |
| ·杜氏盐藻MnSOD的性质 | 第57-59页 |
| 第五章 盐生杜氏藻MnSOD在大肠杆菌K12(SOD~-)中的功能鉴定 | 第59-67页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| ·菌种 | 第59页 |
| ·酶、主要试剂及试剂盒 | 第59-60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| ·载体pET32a-DsMnSOD的构建及转化子的筛选与鉴定 | 第60页 |
| ·接种菌液的准备 | 第60页 |
| ·SOD表达活性测定 | 第60页 |
| ·超氧化物歧化酶基因DsMnSOD在工程菌K12中的功能鉴定 | 第60-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·重组质粒pET32a-DsMnSOD的构建与鉴定 | 第62页 |
| ·SOD活性检测 | 第62页 |
| ·超氧化物歧化酶基因DsMnSOD在工程菌K12(SOD~-)中的功能鉴定 | 第62-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| ·突变菌株以及MnSOD酶特性的验证 | 第66页 |
| ·外源质粒对菌种的影响 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 综述 | 第70-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 在校期间学习情况 | 第89-90页 |
