小G蛋白ROP6在百脉根结瘤信号途径中功能及作用机制的研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 縮略语表 | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-42页 |
| ·植物与微生物共生的意义和种类 | 第13-14页 |
| ·菌根共生 | 第13页 |
| ·根瘤共生 | 第13-14页 |
| ·豆科植物与根瘤菌根瘤共生固氮体系 | 第14-26页 |
| ·根瘤的形成过程 | 第14-15页 |
| ·结瘤因子的感知 | 第15-20页 |
| ·结瘤因子信号转导途径 | 第20-22页 |
| ·结瘤过程中的激素调控 | 第22-24页 |
| ·共生的系统调节 | 第24-26页 |
| ·小G蛋白家族 | 第26-31页 |
| ·小G蛋白的种类 | 第26-28页 |
| ·小G蛋白的结构与调节机制 | 第28-30页 |
| ·小G蛋白的功能 | 第30-31页 |
| ·ROP小G蛋白 | 第31-41页 |
| ·ROP的分类 | 第31页 |
| ·ROP的功能分析 | 第31-37页 |
| ·ROP GTPase的活性调节子 | 第37-38页 |
| ·ROP GTPase下游的靶物 | 第38-39页 |
| ·其他潜在的ROP靶物 | 第39-41页 |
| ·ROP和靶物的相互作用 | 第41页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第41-42页 |
| 2 实验材料与方法 | 第42-59页 |
| ·材料 | 第42-48页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·菌株和质粒 | 第42-43页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第44-46页 |
| ·缓冲液和反应试剂 | 第46-48页 |
| ·方法 | 第48-59页 |
| ·重组质粒的构建 | 第48-49页 |
| ·小范围的酵母转化 | 第49页 |
| ·酵母的小范围Mating | 第49-50页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第50页 |
| ·蛋白质体外相互作用的验证 | 第50-53页 |
| ·小G蛋白的酶活检测 | 第53页 |
| ·基因在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位 | 第53页 |
| ·基因的时空表达 | 第53-54页 |
| ·Real-Time PCR | 第54-55页 |
| ·BiFC实验 | 第55-56页 |
| ·烟草中蛋白相互作用的验证 | 第56-57页 |
| ·农杆菌介导的毛根转化 | 第57-58页 |
| ·组织化学染色 | 第58页 |
| ·转基因植株根毛的观察 | 第58页 |
| ·转基因植株侵染线的观察 | 第58页 |
| ·转基因植株结瘤数目的统计 | 第58页 |
| ·分析软件及生物信息学网站 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-77页 |
| ·ROP6蛋白的研究 | 第59-73页 |
| ·ROP6蛋白的结构分析 | 第59-61页 |
| ·NFR5与ROP6蛋白的相互作用 | 第61-64页 |
| ·NFR5与ROP6蛋白的共定位 | 第64-66页 |
| ·ROP6 GTPase活性的测定 | 第66-67页 |
| ·ROP6基因的表达分析 | 第67-69页 |
| ·ROP6的RNAi影响侵染线的形成和结瘤数目 | 第69-72页 |
| ·酵母双杂交筛选与ROP6相互作用的蛋白 | 第72-73页 |
| ·ROP6突变体的初步研究 | 第73-77页 |
| ·NFR5与ROP6突变体蛋白的相互作用 | 第73-75页 |
| ·ROP6突变体超表达影响根毛对结瘤因子的感知 | 第75-77页 |
| 4 总结与讨论 | 第77-80页 |
| ·总结 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·ROP6可能参与结瘤因子信号的传递 | 第78-79页 |
| ·ROP6在建立共生关系中的作用 | 第79页 |
| ·ROP6的下游靶物 | 第79-80页 |
| 5 展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-101页 |
| 附录一：本研究所用引物 | 第101-102页 |
| 附录二：ROP6的cDNA和蛋白质序列 | 第102-103页 |
| 附录三 已发表的论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
