| 致谢 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第7-9页 |
| 2 材料 | 第9页 |
| ·质粒、菌种、细胞和质粒载体 | 第9页 |
| ·酶和生物试剂 | 第9页 |
| ·主要仪器 | 第9页 |
| 3 方法 | 第9-20页 |
| ·引物设计与合成 | 第9-10页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第10-11页 |
| ·质粒的转化 | 第11页 |
| ·质粒的提取与目的基因的扩增 | 第11-13页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第11-12页 |
| ·目的基因的扩增 | 第12页 |
| ·PCR产物的回收 | 第12-13页 |
| ·目的片段与载体的酶切回收 | 第13页 |
| ·目的片段与表达载体的连接与转化 | 第13-14页 |
| ·穿梭表达质粒的提取 | 第14-15页 |
| ·穿梭表达质粒的鉴定 | 第15页 |
| ·目的基因的核苷酸序列测定 | 第15页 |
| ·穿梭表达质粒在大肠杆菌中诱导表达及检测 | 第15-18页 |
| ·穿梭表达质粒在大肠杆菌中诱导表达 | 第15-16页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第16页 |
| ·Western blotting分析 | 第16-17页 |
| ·重组蛋白的纯化及检测 | 第17-18页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第17页 |
| ·间接ELISA检测 | 第17-18页 |
| ·穿梭表达重组质粒在真核细胞中的表达及检测 | 第18-20页 |
| ·转染质粒的制备 | 第18页 |
| ·BHK-21细胞的转染 | 第18-19页 |
| ·转染细胞的筛选 | 第19页 |
| ·转染细胞中表达蛋白质的检测 | 第19-20页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第19页 |
| ·RT-PCR检测 | 第19页 |
| ·双抗体夹心ELISA检测 | 第19-20页 |
| 4 结果 | 第20-29页 |
| ·表达载体的构建 | 第20页 |
| ·目的基因的获得 | 第20页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20-24页 |
| ·电泳鉴定 | 第20-21页 |
| ·PCR | 第21页 |
| ·酶切鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第21-24页 |
| ·原核表达产物的检测 | 第24-25页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| ·Western-blotting分析 | 第25页 |
| ·原核表达产物的纯化及检测 | 第25-27页 |
| ·稳定性试验 | 第25-26页 |
| ·溶解性判定试验 | 第26页 |
| ·纯化结果 | 第26-27页 |
| ·真核表达产物的检测 | 第27-29页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第27-28页 |
| ·夹心ELISA检测结果 | 第28-29页 |
| 5 讨论 | 第29-33页 |
| ·表达载体的构建 | 第29页 |
| ·pTriEx-VP1在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第29页 |
| ·细胞转染及筛选 | 第29-30页 |
| ·影响pTriEx-VP1在BHK21细胞中高效表达的因素 | 第30-32页 |
| ·关于利用细菌制备口蹄疫病毒基因疫苗的问题 | 第32-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-36页 |
| 文献综述 | 第36-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |