| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 真核生物启动子研究概述 | 第10-12页 |
| 1.1 真核生物启动子的分类 | 第10-11页 |
| 1.2 真核生物启动子的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.3 真核生物启动子的研究方法及应用 | 第12页 |
| 2 FATP1基因的研究进展 | 第12-16页 |
| 2.1 FATP家族的发现与分布 | 第12-13页 |
| 2.2 FATP1 的分子结构 | 第13-14页 |
| 2.3 FATP1的生理功能 | 第14-15页 |
| 2.4 FATP1的作用机制及其表达调控 | 第15-16页 |
| 3 PPARγ基因的研究进展 | 第16-18页 |
| 3.1 PPARγ的组织分布 | 第16页 |
| 3.2 PPARγ的结构特点 | 第16-17页 |
| 3.3 PPARγ的生物学功能 | 第17-18页 |
| 4 荧光定量PCR | 第18-19页 |
| 4.1 荧光定量PCR的原理 | 第18页 |
| 4.2 荧光定量PCR的应用与发展前景 | 第18-19页 |
| 5 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 贵州地方黄牛PPARγ基因在不同组织中的表达规律 | 第20-33页 |
| 1 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1.1 试验材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 试验动物与样品 | 第20页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第20页 |
| 1.1.3 试验仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第21页 |
| 1.2 试验方法 | 第21-23页 |
| 1.2.1 引物的设计 | 第21-22页 |
| 1.2.2 样品总RNA的提取及检测 | 第22-23页 |
| 1.2.3 逆转录及cDNA检测 | 第23页 |
| 1.2.4 qRT-PCR | 第23页 |
| 1.2.5 qRT-PCR数据统计分析 | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-31页 |
| 2.1 样品总RNA的质量检测 | 第23-24页 |
| 2.2 cDNA的质量检测 | 第24-25页 |
| 2.3 qRT-PCR产物特异性检测 | 第25-26页 |
| 2.4 同一品种不同组织PPARγ基因的表达差异 | 第26-27页 |
| 2.5 同一组织不同品种PPARγ基因的表达差异 | 第27-31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 牛FATP1启动子与PPARγ基因的克隆及其真核表达载体的构建 | 第33-50页 |
| 1 材料与方法 | 第33-41页 |
| 1.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 1.1.1 试验样品、菌种和载体 | 第33页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第33页 |
| 1.1.3 试验仪器设备 | 第33页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第33-34页 |
| 1.2 试验方法 | 第34-41页 |
| 1.2.1 关岭牛FATP1基因启动子的克隆 | 第34-36页 |
| 1.2.1.1 牛基因组DNA的提取 | 第34页 |
| 1.2.1.2 牛FATP1基因启动子不同片段的扩增 | 第34-35页 |
| 1.2.1.3 制作感受态细胞 | 第35-36页 |
| 1.2.1.4 pMD-18T-FATP1-Pn重组质粒的构建 | 第36页 |
| 1.2.2 关岭牛PPARγ基因的克隆 | 第36-37页 |
| 1.2.2.1 牛脂肪组织RNA的提取及cDNA的合成 | 第37页 |
| 1.2.2.2 牛PPARγ基因CDS序列的扩增 | 第37页 |
| 1.2.2.3 pMD-18T-PPARγ重组质粒的构建 | 第37页 |
| 1.2.3 pEGFP-N3-FATP1-Pn-PPARγ真核表达载体的构建 | 第37-41页 |
| 1.2.3.1 双酶切pEGFP-N3载体CMV区 | 第37-38页 |
| 1.2.3.2 FATP1-Pn启动子片段和PPARγ目的基因的获得 | 第38-39页 |
| 1.2.3.3 连接、转化及重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 1.2.3.4 菌种保藏 | 第40页 |
| 1.2.3.5 重组质粒的提取 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-48页 |
| 2.1 关岭牛FATP1基因启动子不同片段的克隆 | 第41页 |
| 2.2 pMD-18T-FATP1-Pn重组质粒的鉴定 | 第41-43页 |
| 2.3 关岭牛PPARγ基因的克隆 | 第43-44页 |
| 2.4 pMD-18T-PPARγ重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| 2.5 pEGFP-N3-FATP1-Pn-PPARγ真核表达载体的鉴定 | 第45-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 PPARγ基因在小鼠 3T3-L1脂肪细胞和牛原代脂肪细胞中的表达 | 第50-62页 |
| 1 材料与方法 | 第50-55页 |
| 1.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 1.1.1 细胞 | 第50页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第50页 |
| 1.1.3 试验仪器设备 | 第50页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第50-51页 |
| 1.2 试验方法 | 第51-55页 |
| 1.2.1 小鼠 3T3-L1脂肪细胞和牛原代脂肪细胞的培养 | 第51-53页 |
| 1.2.2 无内毒素重组质粒的提取 | 第53-54页 |
| 1.2.3 小鼠 3T3-L1脂肪细胞和牛原代脂肪细胞的转染 | 第54页 |
| 1.2.4 小鼠 3T3-L1脂肪细胞和牛原代脂肪细胞RNA的提取 | 第54-55页 |
| 1.2.5 逆转录合成cDNA | 第55页 |
| 1.2.6 qRT-PCR | 第55页 |
| 1.2.7 qRT-PCR数据统计分析 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-60页 |
| 2.1 小鼠 3T3-L1脂肪细胞和牛原代脂肪细胞的转染结果 | 第55-57页 |
| 2.2 小鼠 3T3-L1脂肪细胞和牛原代脂肪细胞的cDNA质量检测 | 第57-58页 |
| 2.3 qRT-PCR产物特异性检测 | 第58-59页 |
| 2.4 qRT-PCR检测细胞中FATP1启动子调控PPARγ基因的表达量 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 小结与展望 | 第62-63页 |
| 1 小结 | 第62页 |
| 2 展望 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
