| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·病原学特性 | 第11-12页 |
| ·病毒形态和结构 | 第11页 |
| ·分子生物学特征 | 第11-12页 |
| ·生物学特性 | 第12页 |
| ·流行病学 | 第12-14页 |
| ·病毒自然宿主及传播途径 | 第12-13页 |
| ·流行特征 | 第13-14页 |
| ·流行概况 | 第14页 |
| ·临床症状与病理改变 | 第14-15页 |
| ·临床症状 | 第14页 |
| ·病理变化 | 第14-15页 |
| ·实验室检验 | 第15-16页 |
| ·电镜检查 | 第15页 |
| ·病毒分离 | 第15页 |
| ·核酸检测 | 第15页 |
| ·血清学诊断 | 第15-16页 |
| ·抗原检测 | 第16页 |
| ·防治 | 第16-17页 |
| ·治疗 | 第16页 |
| ·疫苗 | 第16-17页 |
| ·重组蛋白和单克隆抗体在EBOV和MARV方面的应用 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-32页 |
| ·试验材料 | 第19-23页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第19页 |
| ·菌株、质粒及单抗 | 第19页 |
| ·动物与细胞 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第20-23页 |
| ·培养基及相关试剂 | 第20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂 | 第20-21页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第21页 |
| ·Tris-cine系统电泳缓冲液 | 第21页 |
| ·Western Blot相关溶液 | 第21-22页 |
| ·ELISA主要试剂 | 第22页 |
| ·单抗制备主要试剂 | 第22-23页 |
| ·单抗纯化主要试剂 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·enp、mnp和ms基因克隆及重组质粒构建 | 第23-25页 |
| ·引物设计及合成 | 第23页 |
| ·enp、mnp和ms基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·enp、mnp基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·ms融合基因的扩增 | 第24页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第25页 |
| ·阳性重组子的保存 | 第25页 |
| ·enp、mnp和ms基因序列测定 | 第25页 |
| ·重组蛋白ETH、MTH和MS的诱导表达及鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26页 |
| ·重组蛋白ETH和MTH的纯化 | 第26页 |
| ·重组蛋白MS的纯化 | 第26页 |
| ·蛋白浓缩 | 第26页 |
| ·动物免疫 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白ELISA工作条件的优化 | 第27页 |
| ·免疫BALB/c小鼠血清的采集和制备 | 第27页 |
| ·重组蛋白ELISA工作条件的优化 | 第27页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第27-30页 |
| ·Sp2/0细胞的复苏与传代培养 | 第27-28页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第28页 |
| ·骨髓瘤细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第29页 |
| ·细胞融合 | 第29页 |
| ·融合细胞的培养 | 第29页 |
| ·阳性孔的克隆 | 第29-30页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第30页 |
| ·单抗腹水的生产 | 第30页 |
| ·单抗的纯化 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第31-32页 |
| ·细胞培养上清和腹水效价的测定 | 第31页 |
| ·单克隆抗体的亚型鉴定 | 第31页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第31页 |
| ·单抗的亲和力鉴定 | 第31页 |
| ·单抗的表位分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-42页 |
| ·基因克隆及重组质粒 | 第32-34页 |
| ·enp、mnp和ms基因的扩增产物 | 第32页 |
| ·pET-32a(+)-enp、pET-32a(+)-mnp和pET-20b(+)-ms重组质粒的构建及鉴定 | 第32-34页 |
| ·重组蛋白ETH、MTH和MS的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·大量制备重组蛋白ETH、MTH和MS | 第35页 |
| ·重组蛋白ELISA条件的优化 | 第35-36页 |
| ·单抗的筛选及杂交瘤细胞株 | 第36-37页 |
| ·细胞培养上清及腹水的效价 | 第37页 |
| ·单抗Ig亚类 | 第37页 |
| ·单抗的特异性 | 第37-39页 |
| ·大量制备和纯化单抗 | 第39-40页 |
| ·单抗相对亲和力 | 第40-42页 |
| ·单抗识别的抗原表位初步分析 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| ·蛋白的表达纯化 | 第42-43页 |
| ·动物免疫效果 | 第43-44页 |
| ·筛选方法 | 第44页 |
| ·细胞融合 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |