| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| ·假交替单胞菌的研究概况 | 第9-10页 |
| ·糖苷酶及其应用 | 第10页 |
| ·淀粉酶的研究进展 | 第10-14页 |
| ·淀粉 | 第10-11页 |
| ·淀粉酶的分类及其结构 | 第11-13页 |
| ·α-淀粉酶的作用机理 | 第13页 |
| ·α-淀粉酶产生菌及其分离方法 | 第13-14页 |
| ·淀粉酶的应用 | 第14页 |
| ·琼脂酶的研究进展 | 第14-18页 |
| ·琼脂结构及其用途 | 第14-15页 |
| ·琼脂酶的分类 | 第15-16页 |
| ·琼脂酶的作用机制 | 第16页 |
| ·琼脂酶产生菌 | 第16页 |
| ·微生物琼脂酶的酶系及酶学性质 | 第16-18页 |
| ·琼脂酶的应用 | 第18页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-33页 |
| ·实验材料 | 第19-23页 |
| ·实验菌种 | 第19页 |
| ·酶及试剂 | 第19页 |
| ·培养基及试剂 | 第19-23页 |
| ·实验方法 | 第23-33页 |
| ·菌株的筛选 | 第23-24页 |
| ·产淀粉酶菌株的筛选 | 第23-24页 |
| ·产琼脂酶菌株的筛选 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第24页 |
| ·感受态的制备 | 第24页 |
| ·DNA转化 | 第24页 |
| ·DNA重组与转化子的筛选 | 第24-25页 |
| ·淀粉酶基因DNA重组与转化子的筛选 | 第24-25页 |
| ·琼脂酶基因DNA重组与转化子的筛选 | 第25页 |
| ·基因亚克隆 | 第25页 |
| ·基因测序及序列分析 | 第25页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第25-28页 |
| ·淀粉酶基因重组表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·琼脂酶基因重组表达质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第28页 |
| ·粗酶液的制备 | 第28-29页 |
| ·重组α-淀粉酶粗酶液的制备 | 第28页 |
| ·重组β-琼脂酶粗酶液的制备 | 第28-29页 |
| ·重组酶的纯化 | 第29页 |
| ·重组α-淀粉酶的纯化 | 第29页 |
| ·重组β-琼脂酶的纯化 | 第29页 |
| ·重组酶活性测定 | 第29-31页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制备 | 第29-30页 |
| ·α-淀粉酶的活性测定 | 第30页 |
| ·β-琼脂酶的活性测定 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| ·分离胶的制备 | 第31页 |
| ·浓缩胶的制备 | 第31-32页 |
| ·样品制备及电泳 | 第32页 |
| ·染色与脱色 | 第32页 |
| ·重组酶水解产物的TLC分析 | 第32页 |
| ·温度对重组酶活性的影响 | 第32页 |
| ·pH值对重组酶活性的影响 | 第32-33页 |
| ·金属离子对重组酶活性的影响 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-54页 |
| ·假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.MY-1)淀粉酶基因的克隆、表达及其特性鉴定 | 第33-43页 |
| ·菌株的筛选和鉴定 | 第33页 |
| ·从菌株MY-1中克隆α-淀粉酶基因 | 第33-34页 |
| ·基因测序与序列分析 | 第34-38页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第38页 |
| ·融合酶的表达 | 第38-39页 |
| ·融合酶的分离纯化 | 第39-40页 |
| ·淀粉酶的底物及产物分析 | 第40-42页 |
| ·温度及pH值对酶活性的影响 | 第42-43页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第43页 |
| ·假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.JT-6)琼脂酶基因的克隆、表达及其特性鉴定 | 第43-54页 |
| ·菌株的筛选和鉴定 | 第43-45页 |
| ·从菌株JT-6中克隆β-琼脂酶基因 | 第45-46页 |
| ·β-琼脂酶基因测序与序列分析 | 第46-48页 |
| ·β-琼脂酶与其它琼脂酶的氨基酸序列比较 | 第48-49页 |
| ·重组琼脂酶的表达及纯化 | 第49-51页 |
| ·琼脂酶的产物分析 | 第51-52页 |
| ·温度及pH值对酶活性的影响 | 第52-53页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |