| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| ·Zwittermicin A的性质概况 | 第12-16页 |
| ·Zwittermicin A的由来及其结构 | 第12-13页 |
| ·Zwittermicin A与苏云金芽胞杆菌 | 第13-14页 |
| ·培养条件对Zwittermicin A产量的影响及其纯化方法 | 第14页 |
| ·Zwittermicin A的抑菌活性 | 第14-15页 |
| ·Zwittermicin A的增效活性 | 第15-16页 |
| ·Zwittermicin A生物合成的研究 | 第16-25页 |
| ·Zwittermicin A的抗性基因zmaR | 第16-17页 |
| ·Zwittermicin A生物合成途径的相关研究 | 第17-24页 |
| ·抗生素的合成途径 | 第17-21页 |
| ·聚酮及聚酮合成酶 | 第17-18页 |
| ·非核糖体肽及非核糖体肽合成酶 | 第18-20页 |
| ·聚酮/非核糖体肽杂合途径 | 第20-21页 |
| ·Zwittermicin A的生物合成途径推测 | 第21-24页 |
| ·Zwittermicin A的生物合成基因簇尚不完整、合成途径尚不完善 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第25-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·试剂和仪器 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·DNA常规操作 | 第29-31页 |
| ·质粒的制备与纯化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌质粒的制备与纯化 | 第29-30页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的制备与纯化 | 第30页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第30页 |
| ·大肠杆菌总DNA的抽提 | 第30页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的抽提 | 第30页 |
| ·重组质粒的转化 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2法感受态制备及常规转化 | 第30-31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第31页 |
| ·PCR扩增 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第31-32页 |
| ·菌体蛋白样品的制备 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第32页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第32页 |
| ·ZwA的分离与检测 | 第32-33页 |
| ·ZwA活性平板检测 | 第32页 |
| ·ZwA的高效液相色谱检测 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的预测、表达、纯化与活性检测 | 第33-35页 |
| ·腺苷酰化功能域的预测 | 第33页 |
| ·腺苷酰化功能域的超量表达与纯化 | 第33-35页 |
| ·腺苷酰化功能域的扩增 | 第33页 |
| ·腺苷酰化功能域重组质粒的构建 | 第33页 |
| ·腺苷酰化功能域重组菌株的超量表达及其纯化 | 第33-34页 |
| ·腺苷酰化功能域对2,3-二氨基丙酸的特异性检测 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-52页 |
| ·前体物2,3-二氨基丙酸 | 第35-42页 |
| ·前体物2,3-二氨基丙酸的合成途径假设 | 第35-36页 |
| ·前体物2,3-二氨基丙酸合成基因ZwA5A的插入突变研究 | 第36-42页 |
| ·ZwA5A的插入突变 | 第36-38页 |
| ·2,3-二氨基丙酸体外喂养ZwA5A~-突变体 | 第38-40页 |
| ·体内回复突变ZwA5A~-突变体 | 第40-42页 |
| ·腺苷酰化功能域的预测、表达与活性检测 | 第42-52页 |
| ·腺苷酰化功能域的预测 | 第42-44页 |
| ·腺苷酰化功能域的表达 | 第44-52页 |
| ·腺苷酰化功能域的扩增 | 第44-45页 |
| ·腺苷酰化功能域重组质粒的构建 | 第45页 |
| ·腺苷酰化功能域重组菌株的超量表达 | 第45-48页 |
| ·腺苷酰化功能域对2,3-二氨基丙酸的特异性检测结果 | 第48-52页 |
| 4 讨论 | 第52-62页 |
| ·ZwA前体物2,3-二氨基丙酸orf3中编码基因的后续研究 | 第52-55页 |
| ·2,3-二氨基丙酸orf3中腺苷酰化功能域活性检测 | 第52-54页 |
| ·2,3-二氨基丙酸orf3中磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的研究 | 第54-55页 |
| ·ZwA生物合成途径推导 | 第55-59页 |
| ·前体物氨基丙二酰-ACP、羟基丙二酰-ACP和2,3-二氨基丙峻的从头合成 | 第56页 |
| ·前体物的组装 | 第56-57页 |
| ·ZwA骨架的修饰 | 第57-59页 |
| ·ZwA合成基因簇中的功能未知基因非核糖体肽合成酶基因orf4、orf5 | 第59页 |
| ·ZwA的跨膜转运以及ZwA产生菌株的自身免疫保护 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录 | 第71页 |
