| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| ·研究背景 | 第9页 |
| ·超抗原 | 第9-15页 |
| ·超抗原的种类 | 第9页 |
| ·金黄色葡萄菌肠毒素A | 第9-12页 |
| ·超抗原与T细胞结合的特征 | 第12页 |
| ·超抗原的抗肿瘤机制 | 第12-14页 |
| ·SEA抗肿瘤研究进展 | 第14页 |
| ·存在的问题与前景 | 第14-15页 |
| ·血管内皮细胞生长因子VEGF | 第15-16页 |
| ·简介 | 第15-16页 |
| ·抗肿瘤功能 | 第16页 |
| ·本论文的立题依据 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·相关溶液 | 第19-21页 |
| ·抗生素 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-32页 |
| ·血管内表皮生长因子和超抗原融合基因的克隆 | 第22页 |
| ·克隆载体pET40b-VEGF-SEA的构建 | 第22-26页 |
| ·表达载体pET22b-VEGF-SEA的构建 | 第26页 |
| ·转化子的鉴定 | 第26-28页 |
| ·目的蛋白的原核表达及大规模培养 | 第28-29页 |
| ·目的基因的真核表达 | 第29-32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-56页 |
| ·选用菌株 | 第32-33页 |
| ·宿主菌株 | 第32页 |
| ·大肠杆菌JM109 | 第32页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3) | 第32-33页 |
| ·载体 | 第33-37页 |
| ·pET载体 | 第33页 |
| ·本试验所用载体 | 第33-37页 |
| ·合成目的基因序列 | 第37页 |
| ·重组质粒pET40b-VEGF-SEA的构建及转化 | 第37-40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·重组子转化大肠杆菌JM109 | 第38页 |
| ·重组子的鉴定 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40页 |
| ·表达载体pET22b-VEGF-SEA的构建 | 第40-43页 |
| ·载体pET22b的特性 | 第40-41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41页 |
| ·转化大肠杆菌JM109 | 第41页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第41-43页 |
| ·小结 | 第43页 |
| ·融合蛋白VEGF-SEA的氨基酸序列 | 第43-44页 |
| ·最佳诱导条件优化 | 第44-47页 |
| ·IPTG诱导量分析 | 第44-45页 |
| ·诱导时段的选择 | 第45-46页 |
| ·诱导温度实验 | 第46页 |
| ·诱导时间的确定 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| ·VEGF-SEA在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第47-49页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白的分析 | 第48-49页 |
| ·包涵体的溶解和复性 | 第49-52页 |
| ·包涵体的产生 | 第49-50页 |
| ·包涵体的洗涤及复性 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| ·细胞培养级转染 | 第52-56页 |
| ·细胞复苏培养 | 第52页 |
| ·筛选稳定转染细胞株 | 第52-54页 |
| ·稳定转染子单克隆细胞株的筛选 | 第54-55页 |
| ·细胞生长曲线 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 5 展望 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-65页 |
| 7 论文发表情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66页 |