| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·丝状真菌的转化体系 | 第10-18页 |
| ·原生质体的制备 | 第10-14页 |
| ·菌龄 | 第11页 |
| ·菌丝体的培养条件 | 第11页 |
| ·预处理方式 | 第11-12页 |
| ·酶的种类 | 第12页 |
| ·酶浓度 | 第12-13页 |
| ·酶解时间 | 第13页 |
| ·酶解温度 | 第13页 |
| ·酶液pH 值 | 第13页 |
| ·酶液渗透压稳定剂 | 第13-14页 |
| ·其他影响因素 | 第14页 |
| ·原生质体再生的影响因素 | 第14页 |
| ·针对丝状真菌的原生质体转化方法 | 第14-17页 |
| ·PEG（Polyethylene glycol,聚乙二醇）介导转化法 | 第14-15页 |
| ·电击转化法(Electroporation) | 第15页 |
| ·基因枪转化法( Biolistics) | 第15页 |
| ·醋酸锂(Lithium Acetate)转化法 | 第15-16页 |
| ·农杆菌介导转化法(Agrobacterium tumefaciens Mediated Transformati on) | 第16页 |
| ·限制性内切酶介导转化法(Restriction Enzyme Mediated Integration) | 第16-17页 |
| ·丝状真菌遗传转化系统的选择标记 | 第17-18页 |
| ·营养缺陷型标记 | 第17页 |
| ·药物抗性标记 | 第17-18页 |
| ·功能标记 | 第18页 |
| ·GFP 的研究及应用 | 第18-21页 |
| ·GFP 的发现过程 | 第18页 |
| ·GFP 的优点 | 第18-19页 |
| ·GFP 的改进 | 第19页 |
| ·GFP 的应用 | 第19-21页 |
| ·作为报告基因和分子标记 | 第19-20页 |
| ·跟踪观察微生物 | 第20页 |
| ·GFP 用于细胞筛选 | 第20页 |
| ·GFP 在生物防治中的应用 | 第20-21页 |
| ·龙眼焦腐病菌研究概况 | 第21-23页 |
| ·龙眼焦腐病菌的分离 | 第21页 |
| ·龙眼焦腐病菌的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·龙眼焦腐病菌防治技术 | 第22-23页 |
| ·本项目的研究意义、研究内容和研究目标 | 第23-25页 |
| ·本项目的研究意义 | 第23-24页 |
| ·本项目的研究内容 | 第24页 |
| ·本项目的研究目标：建立龙眼焦腐病菌的原生质体转化体系 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-36页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌株和载体来源 | 第25页 |
| ·培养基和试剂种类 | 第25-26页 |
| ·龙眼焦腐病菌产生子座条件的研究 | 第26-27页 |
| ·培养基种类对龙眼焦腐病菌产生子座的影响 | 第26页 |
| ·培养基的初始pH 对龙眼焦腐病菌产生子座的影响 | 第26页 |
| ·光照条件及培养时间对龙眼焦腐病菌产生子座的影响 | 第26-27页 |
| ·原生质体的制备和再生条件的研究 | 第27-30页 |
| ·原生质体的制备 | 第27页 |
| ·菌丝的准备 | 第27页 |
| ·原生质体的制备 | 第27页 |
| ·原生质体的再生 | 第27-28页 |
| ·原生质体的制备和再生条件 | 第28-30页 |
| ·菌龄对原生质体生成量的影响 | 第28页 |
| ·再生培养基种类对原生质体再生率的影响 | 第28页 |
| ·裂解酶种类对原生质体生成量和再生率的影响 | 第28-29页 |
| ·裂解温度对原生质体生成量和再生率的影响 | 第29页 |
| ·裂解时间对原生质体生成量和再生率的影响 | 第29页 |
| ·裂解酶稳渗剂种类对原生质体生成量和再生率的影响 | 第29页 |
| ·酶液pH 对原生质体生成量和再生率的影响 | 第29-30页 |
| ·龙眼焦腐病菌的GFP 遗传转化 | 第30-36页 |
| ·PRB 菌株的活化与保存 | 第30页 |
| ·龙眼焦腐病菌菌丝及原生质体对潮霉素敏感性测定 | 第30页 |
| ·质粒提取（采用天根生化科技有限公司生产的质粒提取试剂盒） | 第30-31页 |
| ·质粒酶切 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第32页 |
| ·龙眼焦腐病菌原生质体转化 | 第32页 |
| ·龙眼焦腐病菌基因组DNA 的提取及提取质量的检测 | 第32-33页 |
| ·转化子的PCR 验证 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第34页 |
| ·E.coli DH_(5α)感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-48页 |
| ·龙眼焦腐病菌产生子座条件研究 | 第36-38页 |
| ·龙眼焦腐病菌培养性状特征 | 第36页 |
| ·培养基种类对龙眼焦腐病菌产生子座的影响 | 第36-37页 |
| ·培养基初始pH 对龙眼焦腐病菌产生子座的影响 | 第37-38页 |
| ·光照条件及培养时间对龙眼焦腐病菌产生子座的影响 | 第38页 |
| ·原生质体制备和再生条件的研究 | 第38-43页 |
| ·原生质体释放观察 | 第38-39页 |
| ·原生质体再生观察 | 第39页 |
| ·菌龄对原生质体生成量的影响 | 第39-40页 |
| ·不同再生培养基对原生质体再生率的影响 | 第40页 |
| ·裂解酶类型及浓度对原生质体生成量和再生率的影响 | 第40-41页 |
| ·酶解温度对原生质体生成量和再生率的影响 | 第41页 |
| ·酶解时间对原生质体生成量和再生率的影响 | 第41-42页 |
| ·酶液稳渗剂对原生质体生成量和再生率的影响 | 第42页 |
| ·酶液pH 对原生质体生成量和再生率的影响 | 第42-43页 |
| ·PEG 介导的原生质体转化 | 第43-48页 |
| ·龙眼焦腐病菌菌丝及原生质体对潮霉素的敏感性 | 第43-44页 |
| ·pEGFP-H3 的验证与转化 | 第44-45页 |
| ·转化子的验证 | 第45-48页 |
| 4 结论与讨论 | 第48-54页 |
| ·结论 | 第48页 |
| ·龙眼焦腐病菌产生子座的条件研究 | 第48页 |
| ·原生质体的制备和再生条件的研究 | 第48页 |
| ·PEG 介导的原生质体转化 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-54页 |
| ·龙眼焦腐病菌产生子座的条件研究 | 第48-50页 |
| ·原生质体的制备和再生条件的研究 | 第50-52页 |
| ·PEG 介导的原生质体转化 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附件1 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
