| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-34页 |
| ·突变体在水稻功能基因组研究中的角色 | 第12-18页 |
| ·植物花药发育调控 | 第18-29页 |
| ·植物花药发育的细胞学过程 | 第18-21页 |
| ·调控植物花药发育的分子机理 | 第21-29页 |
| ·减数分裂前花药发育分子机理 | 第21-24页 |
| ·减数分裂后花药发育分子机理 | 第24-26页 |
| ·花粉发育分子机理 | 第26-28页 |
| ·激素调控花药发育 | 第28-29页 |
| ·植物胚囊发育调控 | 第29-33页 |
| ·植物胚囊的发育过程 | 第29-30页 |
| ·植物胚囊发育的分子机理 | 第30-33页 |
| ·研究目的和意义 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-49页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·质粒载体和菌株 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-49页 |
| ·突变体的种植及筛选 | 第35页 |
| ·水稻叶片小样DNA(少量)的抽提及PCR阳性检测 | 第35-36页 |
| ·大量分离水稻T-DNA插入突变体侧翼序列 | 第36-37页 |
| ·突变家系的突变表型与T-DNA插入的共分离分析 | 第37页 |
| ·水稻各组织总RNA抽提,检测及浓度测定 | 第37页 |
| ·反转录和定量PCR | 第37-39页 |
| ·遗传转化载体的构建及转化方法 | 第39-41页 |
| ·互补载体pC2301-OsAPI5的构建 | 第39-40页 |
| ·双链RNAi载体pDS1301-OsAPI5的构建 | 第40页 |
| ·超量表达OsAPl5载体(pU1301-API5)的构建 | 第40页 |
| ·同时抑制AIP1和AIP2两个基因表达的人工miRNA载体pU1301-amiRNA-AIP1/2的构建 | 第40-41页 |
| ·OsAPl5基因的进化分析 | 第41页 |
| ·OsAPl5基因全长编码序列的确定 | 第41-42页 |
| ·osapi5突变体的细胞学鉴定 | 第42-43页 |
| ·TUNEL检测突变体和野生型花药绒毡层PCD | 第43页 |
| ·Comet Assay定量检测花药组织DNA断裂程度 | 第43页 |
| ·组织原位杂交 | 第43页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第43-44页 |
| ·OsAPI5的转录激活活性检测 | 第44-45页 |
| ·酵母双杂交筛选OsAPI5的互作蛋白 | 第45页 |
| ·荧光双分子互补试验(BiFC)体内验证蛋白之间的互作 | 第45页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP)体外验证蛋白之间的互作 | 第45-46页 |
| ·酵母sub2突变体的互补试验 | 第46页 |
| ·酵母单杂交试验 | 第46-47页 |
| ·凝胶阻滞(EMSA)体外验证AIP1和OsCP1启动子的互作 | 第47页 |
| ·免疫共沉淀体内验证AIP1与OsCP1启动子的互作 | 第47-49页 |
| ·AIP1抗体的制备和特异亲和纯化 | 第47-48页 |
| ·染色质免疫共沉淀(ChIP,Chromatin Immunoprecipitation) | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-90页 |
| ·突变体库TO代植株T-DNA阳性检测及其侧翼序列的分离 | 第49页 |
| ·一个不育突变体osapi5-1的筛选获得 | 第49-52页 |
| ·osapi5-1突变体T-DNA侧翼序列的分离及其不育表型的共分离验证 | 第52-54页 |
| ·等位突变体osapi5-2的鉴定 | 第54-55页 |
| ·双链RNAi抑制OsAPI5的表达导致不育 | 第55-56页 |
| ·OsAPI5的功能失活导致水稻不育 | 第56-58页 |
| ·花药绒毡层的推迟降解导致osapi5-1雄性不育 | 第58-61页 |
| ·功能大孢子的降解导致osapi5-1突变体雌性不育 | 第61-62页 |
| ·扫描电镜观察osapi5-1突变体花药 | 第62-63页 |
| ·透射电镜观察osapi5-1突变体花药 | 第63-66页 |
| ·osapi5-1绒毡层的PCD过程受到抑制导致其降解推迟 | 第66-68页 |
| ·OsAPl5的表达分析 | 第68-70页 |
| ·超量表达OsAPl5不会影响植物生长发育 | 第70-72页 |
| ·OsAPI5编码一个有转录激活活性的核蛋白 | 第72-74页 |
| ·OsAPI5属于一个古老保守的蛋白超家族 | 第74-75页 |
| ·OsAPI5与AIP1和AIP2在体内与体外互作 | 第75-77页 |
| ·AIP1/2的抑制表达导致水稻雄性不育 | 第77-78页 |
| ·AIP1/2的表达谱和亚细胞定位 | 第78-82页 |
| ·AIP1/2是酵母SUB2的直向同源基因 | 第82-83页 |
| ·AIP1/2和OsCP1基因的启动子直接互作 | 第83-87页 |
| ·OsAPI5-AIP1/2和TDR两个调控路径的关系 | 第87-89页 |
| ·OsAPI5-AIP1/2控制花药绒毡层降解的分子模型 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90-97页 |
| ·水稻T-DNA插入突变体库利用的现状及展望 | 第90页 |
| ·绒毡层的PCD过程受到抑制导致osapi5雄性不育 | 第90-93页 |
| ·OsAPI5属于一个古老保守的基因家族 | 第93-94页 |
| ·AIP1/2的功能 | 第94-95页 |
| ·展望 | 第95-97页 |
| ·OsAPI5-AIP1/2控制胚囊发育过程 | 第95页 |
| ·OsAPI5-AIP1/2控制淀粉代谢过程 | 第95-96页 |
| ·OsAPI5-AIP1/2复合体中其它组份 | 第96页 |
| ·OsAPI5-AIP1/2复合体调控的下游基因 | 第96页 |
| ·AIP1/2在细胞质的功能 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 附录1 | 第109-131页 |
| 附录2 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
