| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-19页 |
| 1.α辅肌动蛋白ACTN3的研究进展 | 第12-15页 |
| ·α辅肌动蛋白的分类 | 第12页 |
| ·α辅肌动蛋白的结构 | 第12页 |
| ·α辅肌动蛋白的分子生物学功能 | 第12-13页 |
| ·ACTN3基因 | 第13-15页 |
| ·不同物种ACTN3基因的定位与结构 | 第13页 |
| ·ACTN3与肌纤维 | 第13-14页 |
| ·ACTN3与ACTN2 | 第14-15页 |
| ·ACTN3与其他 | 第15页 |
| 2.单核苷酸多态性概述 | 第15-17页 |
| ·SNP的概念 | 第15页 |
| ·常用的SNP检测方法 | 第15-17页 |
| ·PCR-RFLP | 第16页 |
| ·PCR-SSCP | 第16页 |
| ·焦磷酸测序技术 | 第16-17页 |
| 3.启动子的研究方法 | 第17-19页 |
| ·缺失分析 | 第17页 |
| ·点突变分析 | 第17页 |
| ·DNase Ⅰ足迹实验 | 第17-18页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第18-19页 |
| 第二章 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第三章 材料与方法 | 第20-32页 |
| 1.试验材料 | 第20-23页 |
| ·试验动物、组织样品与性状测定 | 第20页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·组织样品 | 第20页 |
| ·性状测定 | 第20页 |
| ·实验室仪器设备 | 第20-21页 |
| ·常用试剂及试剂盒 | 第21页 |
| ·常用溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·菌株、细胞系和载体 | 第22-23页 |
| 2.试验方法 | 第23-32页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的制备 | 第23-24页 |
| ·总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·总RNA的浓度测定和质量检测 | 第24页 |
| ·cDNA的制备 | 第24页 |
| ·部分cDNA序列、基因组序列的克隆测序 | 第24-26页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·PCR反应体系及程序 | 第24-26页 |
| ·PCR产物的检测 | 第26页 |
| ·PCR产物的回收纯化、克隆和测序 | 第26页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第26页 |
| ·载体连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·阳性克隆子的鉴定及测序 | 第26页 |
| ·主要分子生物学工具 | 第26-27页 |
| ·遗传效应分析 | 第27页 |
| ·表达分析 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR组织表达谱分析 | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR表达分析 | 第28页 |
| ·启动子功能分析 | 第28-32页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·目的片段的双酶切 | 第29页 |
| ·连接 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的原核表达及鉴定 | 第30页 |
| ·质粒提取及双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·细胞培养和转染 | 第30-32页 |
| ·细胞的复苏及培养 | 第30页 |
| ·瞬时转染 | 第30页 |
| ·荧光素酶相对活性测定与分析 | 第30-32页 |
| 第四章 结果与分析 | 第32-52页 |
| 1.猪总RNA提取、cDNA的制备与质量检测结果 | 第32-33页 |
| ·猪总RNA提取与检测 | 第32页 |
| ·cDNA的制备与质量检测结果 | 第32-33页 |
| 2. cDNA序列、基因组序列的克隆及生物信息学预测 | 第33-40页 |
| ·部分cDNA序列的克隆 | 第33页 |
| ·部分基因组序列的克隆 | 第33页 |
| ·生物信息学分析 | 第33-40页 |
| 3. 猪ACTN3基因的SNPs研究 | 第40-46页 |
| ·猪ACTN3基因第11外显子G418A多态位点 | 第40-43页 |
| ·G418A位点TspE Ⅰ-RFLP分型方法的建立 | 第40-41页 |
| ·G418A位点在不同猪品种中的基因型及基因频率分布 | 第41页 |
| ·G418A位点与猪肉质性状、胴体性状的相关分析 | 第41-43页 |
| ·猪ACTN3基因第19内含子A512G多态位点 | 第43-46页 |
| ·A512G位点SacⅡ-RFLP分型方法的建立 | 第43-44页 |
| ·A512G位点在不同品种中的基因型及基因频率分布 | 第44页 |
| ·A512G位点与猪胴体、肉质性状的相关分析 | 第44-46页 |
| 4.猪ACTN3基因的表达分析 | 第46-48页 |
| ·半定量组织表达谱分析 | 第46-47页 |
| ·实时定量PCR时空表达分析 | 第47-48页 |
| 5. 猪ACTN3基因启动子的研究 | 第48-52页 |
| ·启动子区的生物信息学分析 | 第48-50页 |
| ·启动子区真核表达载体的构建 | 第50页 |
| ·启动子重组质粒的活性测定及分析 | 第50-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-58页 |
| 1.基于EST克隆新基因 | 第52页 |
| 2.关于猪ACTN3基因的结构分析 | 第52-53页 |
| 3.关于猪ACTN3基因的SNPs检测及遗传效应分析 | 第53-54页 |
| ·SNPs检测 | 第53页 |
| ·遗传效应分析 | 第53-54页 |
| 4.关于猪ACTN3基因的表达分析 | 第54-55页 |
| ·半定量RT-PCR组织表达谱分析 | 第54页 |
| ·实时定量PCR时空表达谱分析 | 第54-55页 |
| ·关于实时定量PCR | 第54-55页 |
| ·时空表达谱分析 | 第55页 |
| 5.关于猪ACTN3基因启动子结构及活性分析 | 第55-57页 |
| ·猪ACTN3基因启动子结构分析 | 第55-56页 |
| ·猪ACTN3基因启动子活性分析 | 第56-57页 |
| 6.关于启动子区表达载体的构建 | 第57页 |
| 7.下一步工作 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
