| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 引言 | 第13-37页 |
| 1.1 鸡白痢和禽白血病流行及检测用标准物质 | 第13-20页 |
| 1.1.1 禽病现状及特点 | 第13页 |
| 1.1.2 鸡白痢的简述及流行病学 | 第13-14页 |
| 1.1.3 禽白血病的简述及流行病学 | 第14-15页 |
| 1.1.4 鸡白痢和禽白血病的防控 | 第15-16页 |
| 1.1.5 禽病的诊断方法及进展 | 第16-18页 |
| 1.1.5.1 鸡白痢的诊断方法和进展 | 第17-18页 |
| 1.1.5.2 禽白血病的诊断方法和进展 | 第18页 |
| 1.1.6 标准物质重要性 | 第18-19页 |
| 1.1.7 鸡白痢及禽白血病标准物质研发现状 | 第19-20页 |
| 1.2 蛋白质纯化方法 | 第20-27页 |
| 1.2.1 抗体的纯化策略 | 第20-24页 |
| 1.2.1.1 沉淀法 | 第20-21页 |
| 1.2.1.2 离子交换色谱 | 第21-22页 |
| 1.2.1.3 亲和色谱 | 第22-23页 |
| 1.2.1.4 疏水作用色谱 | 第23-24页 |
| 1.2.1.5 其他色谱方法 | 第24页 |
| 1.2.2 带标签重组蛋白的纯化策略 | 第24-27页 |
| 1.3 蛋白质稳定性研究 | 第27-34页 |
| 1.3.1 提高稳定性的方法及策略 | 第27-30页 |
| 1.3.1.1 赋形剂 | 第27-29页 |
| 1.3.1.2 干燥法 | 第29-30页 |
| 1.3.1.3 定点突变 | 第30页 |
| 1.3.1.4 化学修饰 | 第30页 |
| 1.3.2 蛋白质稳定性研究技术 | 第30-34页 |
| 1.3.2.1 差示扫描荧光技术 | 第31-32页 |
| 1.3.2.2 差示扫描量热技术 | 第32-33页 |
| 1.3.2.3 尺寸分析技术 | 第33页 |
| 1.3.2.4 活性分析技术 | 第33-34页 |
| 1.4 本文研究及意义 | 第34-37页 |
| 第2章 禽白血病P27抗原蛋白的纯化制备与稳定 | 第37-55页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第38-39页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第38页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.3.1 菌株的培养及诱导表达 | 第39页 |
| 2.3.2 菌体破碎获取P27原料液 | 第39页 |
| 2.3.3 吸附式Ni亲和层析 | 第39页 |
| 2.3.4 酶切去除组氨酸标签 | 第39-40页 |
| 2.3.5 穿透式Ni亲和层析精制P27 | 第40页 |
| 2.3.6 纯度测定 | 第40-41页 |
| 2.3.7 活性测定 | 第41页 |
| 2.3.8 分子量测定 | 第41-42页 |
| 2.3.9 毛细管凝胶电泳分析 | 第42页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第42-53页 |
| 2.4.1 菌体发酵培养 | 第42-43页 |
| 2.4.2 原料液不同保存条件下的裂解行为 | 第43-44页 |
| 2.4.3 原料液保存条件对亲和层析的影响 | 第44-47页 |
| 2.4.4 酶切条件的优化和裂解机理分析 | 第47-49页 |
| 2.4.5 酶切后P27蛋白的精制 | 第49-51页 |
| 2.4.6 毛细管电泳鉴定 | 第51-52页 |
| 2.4.7 P27蛋白标准物质纯度和活性检测 | 第52-53页 |
| 2.5 本章小结 | 第53-55页 |
| 第3章 鸡白痢沙门氏菌兔抗血清多抗IgG标准物质的纯化制备 | 第55-73页 |
| 3.1 引言 | 第55-56页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第56-57页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第56-57页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第57页 |
| 3.3 实验方法 | 第57-60页 |
| 3.3.1 多抗IgG高效液相色谱分析及定量 | 第57-58页 |
| 3.3.2 等电点及蛋白浓度测定 | 第58页 |
| 3.3.3 阳离子交换层析纯化血清中IgG | 第58页 |
| 3.3.4 阴离子交换层析纯化血清中IgG | 第58-59页 |
| 3.3.5 Protein A亲和层析 | 第59页 |
| 3.3.6 IgG纯度测定及Western Blot检测 | 第59页 |
| 3.3.7 抗体活性检测 | 第59-60页 |
| 3.3.8 稳定剂型快速筛选及加速稳定性试验 | 第60页 |
| 3.4 实验结果 | 第60-70页 |
| 3.4.1 多抗IgG的高效液相色谱检测及定量方法的建立 | 第60-62页 |
| 3.4.2 纯品分析鉴定 | 第62-63页 |
| 3.4.3 阳离子交换层析介质和pH的筛选 | 第63-65页 |
| 3.4.4 阴离子交换层析介质和pH的筛选 | 第65-67页 |
| 3.4.5 Q-XL一步纯化效率 | 第67-68页 |
| 3.4.6 IgG蛋白保存稳定剂研究 | 第68-70页 |
| 3.5 本章小结 | 第70-73页 |
| 第4章 鸡白痢沙门氏菌O-抗原的提取及应用于在抗血清纯化与诊断的探索 | 第73-91页 |
| 4.1 研究背景 | 第73-74页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第74-75页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第74-75页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第75页 |
| 4.3 实验方法 | 第75-80页 |
| 4.3.1 O-抗原糖链的提取与纯化 | 第75-76页 |
| 4.3.2 LPS的提取与纯化 | 第76-77页 |
| 4.3.3 样品中糖、蛋白、核酸的浓度测定 | 第77页 |
| 4.3.4 ITC测定提取O-抗原及LPS与多抗IgG相互作用 | 第77-78页 |
| 4.3.5 GPC计算样品中多糖分子量 | 第78页 |
| 4.3.6 LPS的银染检测 | 第78页 |
| 4.3.7 O-抗原接枝到超大孔介质上 | 第78-79页 |
| 4.3.8 激光共聚焦显微镜检测接枝情况 | 第79-80页 |
| 4.3.9 特异性亲和介质静态吸附实验 | 第80页 |
| 4.3.10 制备ELISA包被板及IgG滴度检测 | 第80页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第80-89页 |
| 4.4.1 O-抗原提取与GPC测定分子量范围 | 第80-82页 |
| 4.4.2 ITC检测O-抗原与多抗IgG的相互作用 | 第82-83页 |
| 4.4.3 LPS提取及ITC测定 | 第83-84页 |
| 4.4.4 激光共聚焦检测O-抗原的有效接枝 | 第84-86页 |
| 4.4.5 静态吸附测定亲和介质特异性 | 第86-87页 |
| 4.4.6 O-抗原与LPS包被及ELISA检测 | 第87-89页 |
| 4.5 本章小结 | 第89-91页 |
| 第5章 结论与展望 | 第91-95页 |
| 5.1 主要结论 | 第91-92页 |
| 5.2 创新点 | 第92页 |
| 5.3 后期工作建议 | 第92-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
