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烟草维管束发育相关基因sm-Nvas启动子顺式作用元件的鉴定

摘要第5-6页
Abstract第6-7页
第一章 文献综述第11-25页
    1.1 真核启动子概述第11-17页
        1.1.1 真核启动子结构第11页
        1.1.2 真核启动子的分类第11-17页
            1.1.2.1 组成型启动子第12页
            1.1.2.2 诱导型启动子第12-14页
            1.1.2.3 组织特异型启动子第14页
            1.1.2.4 维管束组织特异型启动子第14-17页
    1.2 真核启动子研究方法第17-22页
        1.2.1 生物信息学分析法第17-18页
        1.2.2 片段缺失分析法第18页
        1.2.3 酵母单杂交实验第18-19页
        1.2.4 染色质免疫共沉淀第19-20页
        1.2.5 瞬时转染法第20页
        1.2.6 凝胶阻滞分析法第20-21页
        1.2.7 DNaseⅠ足迹法第21-22页
    1.3 本课题的研究目的及意义第22-25页
第二章 sm-Nvas基因启动子区5’端缺失载体的构建及遗传转化第25-40页
    2.1 引言第25页
    2.2 材料与方法第25-28页
        2.2.1 实验材料第25页
        2.2.2 载体和菌株第25-26页
        2.2.3 主要试剂及配方第26-28页
            2.2.3.1 实验试剂第26页
            2.2.3.2 主要试剂配方第26-27页
            2.2.3.3 主要培养基及其配方表第27-28页
        2.2.4 主要仪器设备第28页
    2.3 实验方案第28-34页
        2.3.1 启动子5’端缺失片段引物设计第28-29页
        2.3.2 5’端缺失重组载体构建第29-32页
            2.3.2.1 CTAB法提取W38型烟草叶片DNA第29-30页
            2.3.2.2 5’端缺失片段TA克隆第30-31页
            2.3.2.3 5’端缺失片段重组载体构建第31-32页
        2.3.3 5’端缺失重组载体叶盘法遗传转化烟草第32-34页
            2.3.3.1 根癌农杆菌EHA105电击感受态制备第33页
            2.3.3.2 烟草遗传转化材料准备第33页
            2.3.3.3 5’端缺失片段重组载体电击转化根癌农杆菌EHA105第33-34页
            2.3.3.4 农杆菌介导W38型烟草叶盘遗传转化第34页
    2.4 结果与分析第34-38页
        2.4.1 5’端缺失片段引物设计第34-35页
        2.4.2 5’端缺失片段重组载体的构建第35-37页
        2.4.3 W38型烟草叶盘遗传转化第37-38页
    2.5 讨论第38-40页
第三章 5’端缺失片段-GUS转基因植株的鉴定第40-51页
    3.1 引言第40页
    3.2 材料与方法第40页
        3.2.1 实验材料第40页
        3.2.2 主要试剂第40页
        3.2.3 主要仪器设备第40页
    3.3 实验方案第40-44页
        3.3.1 T0代转基因烟草阳性鉴定第41页
        3.3.2 GUS阳性植株组织化学染色第41页
        3.3.3 GUS T0代阳性植株拷贝数鉴定第41-42页
        3.3.4 sm-Nvas启动子5’端缺失片段-GUS驱动活性分析第42-44页
            3.3.4.1 GUS单拷贝阳性植株叶片总RNA提取第42-43页
            3.3.4.2 RNA反转录第43-44页
            3.3.4.3 GUS表达量分析第44页
    3.4 结果与分析第44-49页
        3.4.1 5’缺失片段-GUS重组载体转基因烟草阳性鉴定第44-45页
        3.4.2 GUS组织化学染色第45-46页
        3.4.3 GUS拷贝数鉴定第46-47页
        3.4.4 sm-Nvas启动子片段活性分析第47-49页
            3.4.4.1 GUS单拷贝植株RNA反转录第47-48页
            3.4.4.2 GUS相对表达量分析第48-49页
    3.5 讨论第49-51页
第四章 5’端缺失片段-GFP转基因植株的鉴定第51-60页
    4.1 引言第51页
    4.2 材料与方法第51页
        4.2.1 实验材料第51页
        4.2.2 主要试剂第51页
        4.2.3 主要仪器设备第51页
    4.3 实验方案第51-53页
        4.3.1 T0代转基因烟草阳性鉴定第52页
        4.3.2 GFP转基因植株叶柄荧光观察第52页
        4.3.3 GFP T0代阳性植株拷贝数鉴定第52-53页
        4.3.4 sm-Nvas启动子 5’端缺失片段-GFP驱动活性分析第53页
            4.3.4.1 GFP单拷贝阳性植株叶片总RNA提取第53页
            4.3.4.2 RNA反转录第53页
            4.3.4.3 GFP表达量分析第53页
    4.4 结果与分析第53-59页
        4.4.1 5’缺失片段-GFP重组载体转基因烟草阳性鉴定第53-54页
        4.4.2 GFP荧光观察第54-55页
        4.4.3 GFP拷贝数鉴定第55-57页
        4.4.4 sm-Nvas启动子片段活性分析第57-58页
            4.4.4.1 GFP单拷贝植株RNA反转录第57页
            4.4.4.2 GFP相对表达量分析第57-58页
        4.4.5 sm-Nvas启动子顺式作用元件分析第58-59页
    4.5 讨论第59-60页
结论第60-61页
参考文献第61-67页
致谢第67-68页
硕士期间发表的论文第68页
参与的科研课题第68页
参与的学术会议第68页

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