| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-20页 |
| 1.1 前言 | 第14-15页 |
| 1.2 苦荞简介 | 第15-16页 |
| 1.2.1 苦荞的植物学特征 | 第15页 |
| 1.2.2 苦荞的生物活性成分 | 第15-16页 |
| 1.3 芦丁水解酶及其相关酶的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 β-糖苷水解酶的研究进展 | 第16页 |
| 1.3.2 β-糖苷水解酶活性位点和催化机制的研究 | 第16-17页 |
| 1.3.3 芦丁水解酶的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 昆虫杆状病毒表达系统 | 第18-19页 |
| 1.4.1 昆虫杆状病毒表达系统简介 | 第18页 |
| 1.4.2 杆状病毒表达系统的特点及应用 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 FtRHE基因的序列鉴定 | 第20-32页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.1 主要材料及试剂 | 第20页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第20页 |
| 2.2.3 实验主要仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.3.1 天然芦丁水解酶的制备 | 第21页 |
| 2.3.2 FtRHE基因克隆 | 第21页 |
| 2.3.3 FtRHE结构序列分析 | 第21页 |
| 2.3.4 芦丁水解酶的生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.3.5 数据及图像处理 | 第21-22页 |
| 2.4 实验结果 | 第22-29页 |
| 2.4.1 天然芦丁水解酶制备 | 第22页 |
| 2.4.2 芦丁水解酶的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.4.3 FtRHE基因的克隆 | 第23页 |
| 2.4.4 FtRHE序列分析 | 第23-26页 |
| 2.4.5 芦丁水解酶理化性质和疏水性分析 | 第26-27页 |
| 2.4.6 芦丁水解酶二级结构预测和结构域分析 | 第27页 |
| 2.4.7 芦丁水解酶的活性位点分析 | 第27-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 FtRHE基因的原核表达 | 第32-42页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验室材料与研究仪器 | 第32-33页 |
| 3.2.1 质粒、菌株及主要试剂 | 第32页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第32-33页 |
| 3.2.3 实验主要仪器及设备 | 第33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.3.1 FtRHE基因原核表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达 | 第36-37页 |
| 3.3.3 数据及图像处理 | 第37页 |
| 3.4 实验结果 | 第37-41页 |
| 3.4.1 目的基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.4.2 T-FtRHE和PRSETC/pGEX-4T-1/pET-32a质粒的双酶切 | 第37-38页 |
| 3.4.3 PRSETC-FtRHE/pGEX-4T-1-FtRHE/pET-32a-FtRHE酶切验证 | 第38-39页 |
| 3.4.4 重组蛋白的表达研究 | 第39页 |
| 3.4.5 优化表达条件的研究 | 第39-41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 FtRHE基因的真核表达 | 第42-52页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 实验室材料与研究仪器 | 第42-43页 |
| 4.2.1 质粒、菌株及主要试剂 | 第42页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第42-43页 |
| 4.2.3 实验主要仪器及设备 | 第43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.3.1 FtRHE基因原核表达载体的构建 | 第43-45页 |
| 4.3.2 重组蛋白的制备 | 第45-46页 |
| 4.3.3 重组蛋白的纯化 | 第46页 |
| 4.3.4 重组蛋白的活性鉴定 | 第46页 |
| 4.3.5 数据及图像处理 | 第46页 |
| 4.4 实验结果 | 第46-51页 |
| 4.4.1 目的基因的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 4.4.2 真核表达载体pFastBacDual-FtRHE的构建 | 第47-48页 |
| 4.4.3 FtRHE在昆虫细胞Sf9中的感染扩增 | 第48页 |
| 4.4.4 FtRHE在真核系统中的表达纯化 | 第48-49页 |
| 4.4.5 FtRHE水解活性的测定 | 第49-51页 |
| 4.5 讨论 | 第51-52页 |
| 小结与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 个人简况 | 第62-65页 |
