| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-26页 |
| 1. 粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe) | 第13页 |
| 2. 细胞周期调控 | 第13-16页 |
| 2.1 细胞周期检验点 | 第13-14页 |
| 2.2 纺锤体组装检验点的激活及沉默 | 第14-16页 |
| 3. 染色体精确分离 | 第16-20页 |
| 3.1 动粒-微管连接 | 第16-19页 |
| 3.2 动粒-微管错误连接的纠正机制 | 第19-20页 |
| 4. Merotelic连接和Monopolin复合体 | 第20-23页 |
| 4.1 Merotelic连接 | 第20-21页 |
| 4.2 Monopolin复合体及其抑制merotelic连接的机制 | 第21-23页 |
| 5. 裂殖酵母核仁蛋白Dnt1的功能介绍 | 第23-24页 |
| 5.1 Dnt1对细胞周期的调控 | 第23-24页 |
| 5.2 Dnt1在SAC沉默中发挥功能 | 第24页 |
| 5.3 Dnt1在rDNA沉默及染色体精确分离中的功能 | 第24页 |
| 6. TEV蛋白酶切系统 | 第24-25页 |
| 7. 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-56页 |
| 1. 材料 | 第26-43页 |
| 1.1. 大肠杆菌菌株 | 第26页 |
| 1.2. 裂殖酵母菌株 | 第26-30页 |
| 1.3. 质粒 | 第30-31页 |
| 1.4. 引物及序列 | 第31-34页 |
| 1.5. 主要仪器及设备 | 第34-35页 |
| 1.6. 实验试剂及耗材 | 第35-36页 |
| 1.7. 常用培养基的配制 | 第36-39页 |
| 1.8. 主要试剂和缓冲溶液的配制 | 第39-43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-56页 |
| 2.1 Drop Test | 第43-44页 |
| 2.2 裂殖酵母菌株的构建 | 第44-46页 |
| 2.3 玻璃珠破碎法提取酵母基因组 | 第46-47页 |
| 2.4 nmt启动子驱动的基因诱导表达 | 第47页 |
| 2.5 荧光观察 | 第47页 |
| 2.6 DAPI染色 | 第47-48页 |
| 2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 2.8 质粒DNA的细菌转化 | 第48-49页 |
| 2.9 常规PCR | 第49-50页 |
| 2.10 定点突变PCR | 第50-51页 |
| 2.11 PCR产物回收 | 第51页 |
| 2.12 DNA酶切反应 | 第51-52页 |
| 2.13 DNA片段胶回收 | 第52页 |
| 2.14 DNA连接反应 | 第52-53页 |
| 2.15 质粒DNA制备 | 第53-54页 |
| 2.16 Western blot | 第54-56页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第56-70页 |
| 1. TEV蛋白酶切系统在裂殖酵母中可以正常发挥功能 | 第56-57页 |
| 2. 寻找可用于强制定位GBP-TEV的载体蛋白 | 第57-59页 |
| 3. 构建带有TEV识别位点的Monopolin蛋白菌株 | 第59-61页 |
| 4. 在着丝粒区特异破坏Mde4蛋白引起菌株TBZ而非HU敏感性 | 第61-62页 |
| 5. 核仁内特异切割Pcs1蛋白,导致菌株产生HU和TBZ双重敏感性 | 第62-65页 |
| 6. 核仁蛋白Dnt1缺失会加强Monopolin复合体缺陷导致的染色体错误分离表型 | 第65-68页 |
| 7. 着丝粒区过表达condensin组分可以解救dnt1Δ pcs1Δ导致的致死效应 | 第68-70页 |
| 第四章 讨论 | 第70-74页 |
| 1 Dnt1和Monopolin复合体相互作用的探讨 | 第70-71页 |
| 2 Dnt1、Monopolin、Aurora B激酶三者参与染色体精确分离的机制 | 第71-72页 |
| 3 Dnt1和Monopolin在rDNA沉默和重组过程中功能的探讨 | 第72页 |
| 4 关于本论文部分实验的解释 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
