| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 核受体家族 | 第12-16页 |
| 1.1.1 核受体的分类 | 第13-15页 |
| 1.1.2 核受体LBD的结构 | 第15-16页 |
| 1.2 孤儿核受体Nur77 | 第16-20页 |
| 1.2.1 Nur77 LBD的结构 | 第16-18页 |
| 1.2.2 Nur77的生理功能 | 第18页 |
| 1.2.3 Nur77和肺癌 | 第18-19页 |
| 1.2.4 Nur77和前列腺癌 | 第19-20页 |
| 1.2.5 Nur77的功能特性小结 | 第20页 |
| 1.3 孤儿核受体Daxl | 第20-23页 |
| 1.3.1 Dax1的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 Dax1的生理功能 | 第21-22页 |
| 1.3.3 Dax1和泛素化 | 第22-23页 |
| 1.3.4 Dax1和肿瘤 | 第23页 |
| 1.4 Nur77和Dax1 | 第23-24页 |
| 1.5 本文研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 X射线晶体学 | 第25-36页 |
| 2.1 X射线晶体学的发展 | 第25-26页 |
| 2.2 晶体制备 | 第26-30页 |
| 2.2.1 pH对蛋白结晶的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.2 温度对蛋白结晶的影响 | 第27页 |
| 2.2.3 结晶动力学 | 第27-28页 |
| 2.2.4 不良晶体的形成 | 第28-29页 |
| 2.2.5 晶核种植 | 第29-30页 |
| 2.2.6 浸泡法和共晶法 | 第30页 |
| 2.3 几何晶体学 | 第30-32页 |
| 2.3.1 晶格理论 | 第30-31页 |
| 2.3.2 点群和空间群 | 第31页 |
| 2.3.3 衍射群 | 第31-32页 |
| 2.4 晶体衍射及衍射数据处理 | 第32-35页 |
| 2.4.1 X射线衍射原理 | 第32-33页 |
| 2.4.2 衍射数据处理 | 第33页 |
| 2.4.3 相位获取 | 第33-34页 |
| 2.4.4 模型搭建和精修 | 第34页 |
| 2.4.5 模型评估 | 第34-35页 |
| 2.5 本文涉及到的结构生物学方法 | 第35-36页 |
| 第三章 实验材料和方法 | 第36-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.3 菌株和质粒 | 第38页 |
| 3.2 实验相关试剂配制 | 第38-42页 |
| 3.2.1 感受态制备相关试剂 | 第38页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.3 核酸电泳试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.4 蛋白表达纯化主要试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.5 Western Blot相关试剂 | 第41页 |
| 3.2.6 细菌培养相关试剂 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.3.1 感受态的制备 | 第42-43页 |
| 3.3.2 LIC(不依赖连接酶的克隆)和转化步嫌 | 第43页 |
| 3.3.3 亲和层析步骤 | 第43-44页 |
| 3.3.4 GST pull down和Western Blot步骤 | 第44-45页 |
| 3.3.5 质粒提取和胶回收 | 第45页 |
| 3.3.6 部分克隆引物设计 | 第45-46页 |
| 3.3.7 IPTG诱导表达系统和重组蛋白的表达纯化 | 第46-47页 |
| 3.3.8 FortoBio检测分子间相互作用 | 第47-48页 |
| 3.3.9 动态光分析 | 第48-49页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第49-69页 |
| 4.1 重组质粒的构建 | 第49页 |
| 4.1.1 Nur77 LBD相关克隆 | 第49页 |
| 4.1.2 Dax1相关克隆 | 第49页 |
| 4.2 重组蛋白表达与纯化 | 第49-54页 |
| 4.2.1 pET-22b-Nur77 LBD的表达纯化 | 第51-52页 |
| 4.2.2 pGEX-4T-1-Nur77 LBD的表达纯化 | 第52页 |
| 4.2.3 Dax1的其他载体的表达纯化结果 | 第52-53页 |
| 4.2.4 pET-MBP-Dax1的表达纯化 | 第53-54页 |
| 4.2.5 Dax1小肽的表达情况 | 第54页 |
| 4.3 Dax1的稳定性检测和结构分析 | 第54-57页 |
| 4.4 Dax1小肽和Nur77 LBD相互作用的研究 | 第57-62页 |
| 4.4.1 核心小肽的发现 | 第57-61页 |
| 4.4.2 FortBio实验 | 第61-62页 |
| 4.5 Dax1小肽和Nur77 LBD的晶体复合物筛选 | 第62-64页 |
| 4.5.1 原条件下晶体复合物的筛选 | 第62-64页 |
| 4.5.2 晶体复合物的二次筛选 | 第64页 |
| 4.6 复合物结构模拟和预测 | 第64-65页 |
| 4.7 Dax1(201-225)小肽和其他蛋白的相互作用 | 第65-68页 |
| 4.7.1 Dax1(201-225)小肽和β-Catenin的相互作用 | 第65-67页 |
| 4.7.2 Dax1(201-225)小肽和Alien的相互作用 | 第67页 |
| 4.7.3 Dax1(201-225)小肽和LRH-1之间的相互作用 | 第67-68页 |
| 4.8 结果分析与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
